本文選題：誘導多能性干細胞 + 腦出血��； 參考：《鄭州大學》2014年碩士論文

【摘要】：出血性腦卒中（ICH）是一種嚴重的腦卒中亞型，它具有高發(fā)病率、死亡率、致殘率和復發(fā)率的特點，且目前尚缺乏有效的治療措施。由腦出血引發(fā)的大腦損傷的機制較復雜，而其最初的傷害（原發(fā)性損害）主要體現在血腫在腦實質內的形成和擴張；其次繼發(fā)性的損害是由三種相互交織的級聯反應引起的，包括顱內炎癥反應，紅細胞裂解和凝血酶的產生等，繼發(fā)性損害可通過腦水腫、神經細胞凋亡和退化引起嚴重的神經功能障礙，甚至死亡。越來越多的證據表明，炎癥在腦出血引起的繼發(fā)性腦損害中起到極其關鍵的作用，并提示炎癥通路是具有應用前景的腦出血治療靶點。 干細胞治療在實驗性ICH模型的神經修復等研究中得到廣泛應用。誘導多能干細胞（iPS細胞/iPSCs）是一種新的干細胞群，該干細胞群的獲得是通過導入特定的轉錄因子將終末分化的體細胞重編程為多能干細胞，并且因為避免了倫理性或免疫原性的問題被視為有應用前景的臨床細胞治療候選。最近的研究表明，，它可減少在缺血性腦卒中和人類疾病的其他動物模型中的炎癥性損害。不過，目前還不清楚iPSCs的治療是否有可能在出血性腦卒中后的急性先天性炎癥反應中發(fā)揮抗炎作用。在本項研究中，我們在膠原酶誘發(fā)的大鼠腦出血性卒中模型中移植iPS細胞，并探討其對腦急性炎癥、神經損傷和恢復的治療效果。 目的: 在膠原酶誘發(fā)的大鼠腦出血性卒中模型中，探討誘導多能干細胞移植對腦急性炎癥、神經損傷和恢復的治療效果。 方法: 1.選取80只SD大鼠，20只立體注射無菌生理鹽水為假手術組（Sham組）；60只立體定位注射Ⅶ型膠原酶于左側紋狀體，建立腦出血模型；造模后6小時后隨機分成兩組分別原位注射誘導多能干細胞(5μl PBS中懸浮1×106個iPSCs細胞)和磷酸緩沖液(5μl PBS），即移植組（iPSCs組）與模型組（PBS組）； 2.建模后第48小時，腦血腫周圍組織熒光定量PCR檢測兩組大鼠血腫周圍炎癥因子水平；第3天，免疫熒光染色檢測血腫周圍的炎癥細胞與神經凋亡細胞，并且采用干濕重法與磁共振成像分析來測量兩組大鼠腦含水量；采用改良肢體平衡試驗MLPT在建模后第0,1,3,7,14,28以及42天分別對兩組大鼠進行行為學功能評價； 3.第42天，尼氏染色觀察腦出血后神經元損傷修復效果以及免疫熒光染色觀察膠質疤痕厚度和探測移植的干細胞。 結果: 1.與模型組相比，移植組促進大鼠神經功能恢復，MLPT評分從第14天起至42天均高于模型組（P0.01）； 2.移植組腦血腫旁組織中促炎性因子白介素1β（IL-1β）、IL-6和腫瘤壞死因子α（TNF-α）顯著下降，而抗炎性因子IL-10升高了2倍。出血半球的腦含水量較模型組低（P0.05），非出血半球無差別；中性粒細胞和小膠質細胞較模型組均有不同程度的下降（P0.05），以TUNEL和活化的半胱天冬蛋白酶3（active caspase-3）為標記的壞死與凋亡的神經細胞在移植組中細胞數低于模型組（P0.05）。 3.移植的干細胞存活于血腫周圍；與模型組相比，移植組的神經細胞恢復較好（P0.05），膠質疤痕的厚度較低（P0.01）。 結論: 移植誘導多能性干細胞可能通過減輕實驗性腦出血急性炎癥反應和損傷促進神經功能恢復。
[Abstract]:Hemorrhagic stroke (ICH) is a serious subtype of cerebral apoplexy. It has the characteristics of high incidence, mortality, disability and recurrence rate, and it is still lack of effective treatment. The mechanism of brain injury caused by cerebral hemorrhage is complex, and its initial injury (primary damage) is mainly reflected in the formation and formation of hematoma in the brain parenchyma. The secondary damage is caused by three interlaced cascade reactions, including intracranial inflammation, erythrocyte lysis, and the production of thrombin. Secondary damage can be caused by brain edema, nerve cell apoptosis and degeneration, causing severe neurological dysfunction and death. More and more evidence suggests that inflammation is in the brain. It plays an important role in secondary brain damage caused by blood. It also suggests that inflammatory pathway is a promising therapeutic target for intracerebral hemorrhage.
Stem cell therapy is widely used in the research of neural repair of experimental ICH models. Induced pluripotent stem cells (iPS cell /iPSCs) is a new stem cell group. The stem cell group is obtained by reprogramming the end differentiated somatic cells by introducing specific transcription factors into pluripotent stem cells, and because it avoids ethical or exemption. The problem of Phytophthora is considered as a promising candidate for clinical cell therapy. Recent studies have shown that it can reduce inflammatory damage in ischemic stroke and other animal models of human disease. However, it is not clear whether the treatment of iPSCs is likely to occur in acute congenital inflammatory responses after hemorrhagic stroke. In this study, we transplanted iPS cells in the rat model of cerebral hemorrhagic stroke induced by collagenase, and discussed the therapeutic effects on acute brain inflammation, nerve injury and recovery.
Objective:
In the rat model of intracerebral hemorrhagic stroke induced by collagenase, the therapeutic effects of induced pluripotent stem cell transplantation on acute inflammation, nerve injury and recovery were explored.
Method:
1. 80 SD rats were selected and 20 sterile saline were injected into the sham group (group Sham); 60 stereotaxic collagenase was injected into the left striatum, and the cerebral hemorrhage model was established. After 6 hours, the model was randomly divided into two groups to induce the pluripotent stem cells (5 mu L PBS suspended in 1 * 106 iPSCs cells) and the phosphate buffer solution. 5 L PBS), namely the transplant group (group iPSCs) and the model group (group PBS).
2. after forty-eighth hours of modeling, fluorescence quantitative PCR around hematoma was used to detect the level of inflammatory factors around hematoma in two groups of rats; third days, immunofluorescence staining was used to detect the inflammatory cells and apoptotic cells around hematoma, and the water content of the two groups of rats was measured by dry wet weight method and magnetic resonance imaging (MRI), and the improved limb balance was improved. Experiment MLPT evaluated behavioral function of two groups of rats on 0,1,3,7,14,28 and 42 days after modeling respectively.
3. on forty-second days, Nissl staining was used to observe the repair effect of neuron damage after intracerebral hemorrhage, and the thickness of glial scar and the detection of transplanted stem cells were observed by immunofluorescence staining.
Result:
1. compared with the model group, the transplantation group promoted the recovery of neurological function in rats, and the MLPT score increased from fourteenth days to 42 days, which was higher than that of the model group (P0.01).
In 2. transplantation group, the proinflammatory factor (IL-1 beta), IL-6 and tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) in the Para Para tissue were significantly decreased, while the anti inflammatory factor IL-10 increased by 2 times. The water content of the cerebral hemorrhage hemisphere was lower than that of the model group (P0.05), and the non hemorrhagic hemisphere was not different. The neutrophils and microglia were different to the model group. The number of cells with necrosis and apoptosis marked by TUNEL and activated caspase 3 (active caspase-3) was lower in the transplanted group than in the model group (P0.05).
3. the transplanted stem cells survived around the hematoma. Compared with the model group, the nerve cells recovered well in the transplantation group (P0.05), and the thickness of the glial scar was low (P0.01).
Conclusion:
Transplantation induced pluripotent stem cells may promote neurological function recovery by alleviating acute inflammation and injury in experimental intracerebral hemorrhage.

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

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本文編號：1820089