發(fā)布時(shí)間：2018-04-06 03:04

  本文選題：miR-146a　切入點(diǎn)：miR-193b*　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2013年碩士論文

【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)篩選并驗(yàn)證可用于診斷、預(yù)測膿毒癥預(yù)后的血清miRNA，并觀察血清miRNA在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的動(dòng)態(tài)變化及與疾病的關(guān)系。 方法：以2011年9月10日至2012年12月30日期間在中國人民解放軍總醫(yī)院呼吸重癥監(jiān)護(hù)病房、急診重癥監(jiān)護(hù)病房和外科重癥監(jiān)護(hù)病房的住院患者為研究對(duì)象，收集滿足膿毒癥兩項(xiàng)或兩項(xiàng)以上條件感染患者的血標(biāo)本，共66例。按照28天疾病轉(zhuǎn)歸情況，分為生存患者33例，死亡患者33例，并以24名健康人血清作為對(duì)照。采集第1、3、5、7、10、14天的血清樣本，并記錄對(duì)應(yīng)時(shí)間的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、血生化、凝血功能及動(dòng)脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果。利用qRT-PCR驗(yàn)證前期測序篩選出的差異表達(dá)miRNA分子，對(duì)有差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行ROC曲線分析，比較曲線下面積。最后將上述篩選出的miRNA和常用指標(biāo)包括基礎(chǔ)疾病、WBC、CRP、APECHEⅡ評(píng)分和SOFA評(píng)分均納入二分類變量logistic回歸分析，篩選同膿毒癥預(yù)后相關(guān)的因素。對(duì)最終篩選的miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測，探討其參與膿毒癥發(fā)病的機(jī)制。 結(jié)果：選取同膿毒癥相關(guān)的7種miRNA(miR-16，miR-122，miR-146a，miR-150，，miR-193b*，miR-483-5p和miR-574-5p)進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。驗(yàn)證后本研究的主要結(jié)果如下：1）66例膿毒癥患者與24例健康對(duì)照組在各個(gè)觀測時(shí)間點(diǎn)的組間比較，miR-483-5p和miR-574-5p差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）, miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150和miR-193b*的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.001）；2）66例膿毒癥患者中的33例生存組和33例死亡組比較， miR-193b*、miR-574-5p在各時(shí)間點(diǎn)上p值均小于0.001，miR-16在第1天（p=0.041）、miR-122在第1天（p=0.026）和第10天(p=0.040)，miR-483-5p在第1天(p=0.009)、第5天(p=0.014)第14天(p=0.042)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余miRNAs在各時(shí)間點(diǎn)的組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；3）ROC曲線分析得到miR-146a在各個(gè)觀測時(shí)間點(diǎn)診斷膿毒癥的AUC最大（AUC90%），敏感性和特異性都較高；4）將生存組和死亡組存在差異表達(dá)的4種miRNA入組第1天的表達(dá)量水平同對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的SOFA評(píng)分、APACHEⅡ評(píng)分、WBC和CRP做預(yù)測病死率的ROC受試曲線，結(jié)果顯示，miR-193b*的AUC最大為0.858(0.763,0.952)，其次是miR-574-5p和miR-483-5p，其AUC分別是0.711(0.573,0.850)和0.681(0.545,0.817)；5）利用二分類變量logistic回歸分析評(píng)價(jià)膿毒癥的危險(xiǎn)因子與保護(hù)因子，結(jié)果顯示年齡、SOFA評(píng)分,miR-122、miR-193b*、miR-483-5p和miR-574-5p在評(píng)估膿毒癥預(yù)后方面有重要的價(jià)值（p0.05），但只有miR-193b*進(jìn)入最后的回歸方程，OR是0.769(95%CI，0.667-0.887)，提示miR-193b*是膿毒癥預(yù)后獨(dú)立的危險(xiǎn)因子；6）利用miRanda和targetscan這兩個(gè)靶基因數(shù)據(jù)庫對(duì)miR-193b*進(jìn)行靶基因預(yù)測，共預(yù)測得到18個(gè)在兩個(gè)數(shù)據(jù)庫中有交集的靶基因，并通過KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)靶基因進(jìn)行通路注釋，其中7個(gè)靶基因可能作用于膿毒癥的相關(guān)通路，為下一步的研究建立了良好的基礎(chǔ)。 結(jié)論：1.證實(shí)了miR-16、miR-122、miR-146a、miR-150在膿毒癥病程中表達(dá)穩(wěn)定，可作為診斷膿毒癥的生物標(biāo)記物，其中miR-146a的診斷效果最好；2.MiR-193b*是一種可用于膿毒癥診斷的生物標(biāo)記物，并可以用來評(píng)價(jià)膿毒癥的預(yù)后，是膿毒癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因子；3.經(jīng)預(yù)測，miR-193b*可調(diào)控18個(gè)靶基因，其中7個(gè)靶基因可能作用于膿毒癥的相關(guān)通路。
[Abstract]:Objective: the aim of this experiment is to screen and verify the serum miRNA that can be used for diagnosis and predict the prognosis of sepsis, and observe the dynamic changes of serum miRNA in the course of disease development and its relationship with disease by real-time fluorescence quantitative PCR.
Methods: from September 10, 2011 to December 30, 2012 in General Hospital of PLA respiratory intensive care ward, emergency ICU and surgical ICU hospitalized patients as the research object, collecting satisfied sepsis in two or two of the above conditions infection of blood specimens, a total of 66 cases. According to the 28 days of disease prognosis, divided into 33 cases the survival of patients, 33 patients died, and 24 healthy people as control group. Serum collected serum samples in 1,3,5,7,10,14 days, and record the corresponding time of vital signs, CRP, PCT, blood routine, blood biochemistry, blood coagulation function and arterial blood gas analysis results. The expression of miRNA between pre screened by qRT-PCR sequencing verification. The different expression of miRNA by ROC curve analysis, comparison of the area under the curve. Finally, the selected miRNA and common indicators including basic disease, WBC, CRP, APECH E II score and SOFA score were all included in the two categorical variable logistic regression analysis. The factors related to the prognosis of sepsis were screened. Target genes of the final screened miRNAs were predicted, and the mechanism of their involvement in the pathogenesis of sepsis was discussed.
Results: select the same 7 sepsis associated with miRNA (miR-16, miR-122, miR-146a, miR-150, miR-193b*, miR-483-5p and miR-574-5p) qRT-PCR verification. The main results of this study are as follows: 1) after verification of 66 cases of patients with sepsis and 24 healthy control group at each observation time point between the two groups miR-483-5p and miR-574-5p, there was no significant difference (P0.05), miR-16, miR-122, miR-146a, there was significant difference in the expression of miR-150 and miR-193b* (p0.001); 2) 66 cases of miR-193b* patients with sepsis in 33 cases of survival group and 33 cases of death group, miR-574-5p at each time point, P values were less than in 0.001, miR-16 in first days (p=0.041), miR-122 (p=0.026) in first days and tenth days (p=0.040), miR-483-5p (p=0.009) in first days, fifth days and fourteenth days (p=0.014) (p=0.042) the difference was statistically significant, no significant remaining miRNAs at each time point between group differences The significance (P0.05); 3) ROC miR-146a curve analysis in various time points in diagnosis of sepsis AUC (AUC90%), high sensitivity and specificity; 4) the survival group and death group, there are 4 miRNA in group first days the expression level of differentially expressed with corresponding time points SOFA score, APACHE score, WBC and CRP to predict mortality rate of ROC test results show that the miR-193b* curve, the maximum is 0.858 AUC (0.763,0.952), followed by miR-574-5p and miR-483-5p, the AUC were 0.711 (0.573,0.850) and 0.681 (0.545,0.817); 5) regression analysis of risk factors and protective factors of sepsis sepsis using two classification variables logistic, the results showed that age, SOFA score, miR-122, miR-193b*, miR-483-5p and miR-574-5p have important value in assessing the prognosis of sepsis (P0.05), but only miR-193b* into the final regression equation, OR is 0.769 (95%CI, 0.6 67-0.887), suggesting that miR-193b* is a risk factor for sepsis prognosis; 6) potential target genes of miR-193b* were predicted by miRanda and targetscan of the two target genes were predicted by the database, 18 of the two databases have target genes overlap, and the database by KEGG pathway annotation of target genes, including related pathways 7 target genes may play a role in sepsis, established a good foundation for the next research.
Conclusion: 1. confirmed miR-16, miR-122, miR-146a, miR-150 expression in sepsis patients, can be used as a biological marker for the diagnosis of sepsis, the diagnosis of miR-146a is the best; 2.MiR-193b* is a kind of biomarkers for the diagnosis of sepsis, and can be used to evaluate the prognosis of sepsis that is the independent risk factor of sepsis; 3. after the forecast, miR-193b* can regulate the expression of 18 target genes, 7 genes related to the pathway may play a role in sepsis.

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：1717664