本文選題：過敏樣休克　切入點：ASGM1　出處：《華中科技大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：背景 過敏性休克的主要發(fā)病機(jī)制為：變應(yīng)原與肥大細(xì)胞表面特異性IgE結(jié)合,介導(dǎo)IgE受體FcεⅠ交聯(lián),激活肥大細(xì)胞使之脫顆粒并釋放組胺等過敏性介質(zhì),導(dǎo)致過敏反應(yīng)發(fā)生。此外,變應(yīng)原也可與特異性IgG1抗體結(jié)合,介導(dǎo)FcγⅢ交聯(lián),激活嗜堿粒細(xì)胞而引發(fā)過敏性休克,PAF是參與此機(jī)制的主要效應(yīng)分子。但是,上述機(jī)制并不能用于解釋臨床患者和實驗動物所見的全部過敏反應(yīng)現(xiàn)象。作者前期實驗發(fā)現(xiàn),給EAE小鼠或經(jīng)PTX預(yù)處理的小鼠注射抗ASGM1抗體,可導(dǎo)致體溫降低、活動能力下降甚至死亡等過敏樣休克癥狀。 目的 進(jìn)一步證實抗ASGM1抗體可導(dǎo)致PTX預(yù)處理的小鼠發(fā)生過敏樣休克,并探討其作用機(jī)制。 方法 1.動物模型制備：在第0天和第2天腹腔注射PTX,第7天通過腹腔或尾靜脈 分別注射抗ASGM1抗體、抗PK136抗體、PAF、PTX和重組鞭毛蛋白。 2.體內(nèi)封閉：使用不同抗體和拮抗劑處理,如抗MAR-1抗體清除嗜堿粒細(xì)胞；抗PK136抗體用于清除NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞；氯化釓(GdCl3)用于清除單核／巨噬細(xì)胞;triprolidine抑制組胺作用；CV-3988抑制PAF作用。 3.檢測指標(biāo)： (1)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面ASGM1表達(dá),及PTX處理組嗜堿粒細(xì)胞數(shù)量變化和功能改變；ELISA檢測血清IgE水平。 (2)體外培養(yǎng)骨髓來源嗜堿粒細(xì)胞,觀察抗ASGM1抗體刺激后胞漿鈣離子濃度和ERK磷酸化反應(yīng),以及LysoPAFAT/LPCAT2mRNA水平改變。 (3) Evans blue檢測血管通透性,鬼筆環(huán)肽檢測F-actin(反映PAF和PTX對內(nèi)皮細(xì)胞的作用)。 (4) Real-time PCR、組織免疫熒光和WB檢測PTX處理對組織和內(nèi)皮細(xì)胞IL-33合成和釋放的影響。 結(jié)果： 1.抗ASGM1抗體和細(xì)菌鞭毛蛋白均可通過ASGM1介導(dǎo)PTX預(yù)處理小鼠發(fā)生過敏樣休克。 2. ASGM1介導(dǎo)的過敏樣休克中,嗜堿粒細(xì)胞是主要效應(yīng)細(xì)胞,PAF是主要效應(yīng)分子。 3.抗ASGM1可直接導(dǎo)致嗜堿粒細(xì)胞胞漿鈣離子濃度升高、ERK通路活化,活化的嗜堿粒細(xì)胞可合成、釋放PAF。 4.PTX處理可直接導(dǎo)致血管通透性升高,并升高內(nèi)皮細(xì)胞對PAF敏感性,小鼠易發(fā)過敏性休克。 5.PTX處理可致嗜堿粒細(xì)胞升高,提高IgE水平,增強(qiáng)嗜堿粒細(xì)胞功能。 6.PTX處理可促進(jìn)組織及內(nèi)皮細(xì)胞釋放IL-33。 結(jié)論： 細(xì)菌鞭毛蛋白可通過ASGM1激活嗜堿粒細(xì)胞并釋放PAF,介導(dǎo)過敏性休克發(fā)生。內(nèi)皮細(xì)胞損傷可致血管通透性升高并釋放IL-33,從而增強(qiáng)過敏性應(yīng)答和過敏易感性。
[Abstract]:Background. The main pathogenesis of anaphylactic shock is that allergen binds to mast cell surface specific IgE, mediates IgE receptor FC 蔚 鈪，

本文編號：1659292