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谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激作用效果的研究

發(fā)布時間:2016-10-24 20:42

  本文關鍵詞:谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激作用效果的研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《河北醫(yī)科大學》 2015年

谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激作用效果的研究

劉翠華  

【摘要】:目的:探討谷氨酰胺可否對膿毒癥小鼠的氧化應激損傷起到減輕或者延緩,從而在危重癥疾病氧化應激狀態(tài)下發(fā)揮保護作用。方法:1動物分組與造模方法:96只昆明小鼠按完全隨機方法分成4組,每組24只,分別設為空白組、模型組、谷氨酰胺低劑量組和谷氨酰胺高劑量組?瞻捉M腹腔注射生理鹽水,模型組和谷氨酰胺組腹腔注射內(nèi)毒素制造膿毒癥動物模型,注射計量為5mg/kg;造型成功后模型組尾靜脈注射生理鹽水,谷氨酰胺低劑量組1h后尾靜脈注射0.75g/kg谷氨酰胺,高劑量組1h后注射1.5g/kg谷氨酰胺。分別在1h、6h、12h眼眶取血后處死小鼠,解剖分離動物肝,用液氮迅速冷凍,之后放入-80℃低溫冰箱保存。2谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化酶歧化酶、丙二醛測定方法取4組小鼠血清、肝組織勻漿進行氧化應激指標超氧化酶歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)的測量。對樣品測試前先將其從-80℃低溫冰箱中取出,放入4℃冰箱中進行解凍。用冰冷的生理鹽水對動物組織塊進行漂洗,去除血液,用濾紙擦干,精確稱重0.1g,置于勻漿管中,以重量(g):體積(ml)=1:9的比例加0.9ml生理鹽水于勻漿管中,用眼科小剪在冰水浴條件下快速剪碎組織塊。在冰水浴條件下手動勻漿組織塊,30秒/次,間歇30秒,如此重復研磨6~8次,制成10%組織勻漿。用高速離心機2500~3000r/min將制備好的10%勻漿液離心15min,取上清液。取適量10%的勻漿液按體積比1:9稀釋成1%的組織勻漿待測。為保證實驗結果準確性,當天對勻漿液進行測定。3采用Excle2007進行數(shù)據(jù)錄入,SPSS13.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計描述與分析。計量資料的統(tǒng)計描述結果以(x_±s)表示,對4組數(shù)據(jù)進行正態(tài)性和方差齊性檢驗,如果各組數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性和方差齊性,則選擇參數(shù)檢驗方法。兩個獨立樣本的比較采用完全獨立兩樣本比較的t檢驗,三個獨立樣本的比較采用單因素方差分析。如資料不服從正態(tài)性和方差齊性,采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H非參數(shù)檢驗,進一步的兩兩比較采用Nemenyi法檢驗。檢驗水準α=0.05,P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。結果:1小鼠血清和肝臟SOD指標水平比較:1.1 SOD指標1小時時刻比較:1.1.1血清SOD指標比較:四組小鼠SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清SOD水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組血清SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.1.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟SOD水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而模型組肝臟SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.2 SOD指標6小時時刻比較:1.2.1血清SOD指標比較:四組小鼠血清SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);空白組血清SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.2.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組肝臟SOD水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組肝臟SOD水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.3 SOD指標12小時時刻比較:1.3.1血清SOD指標比較:四組小鼠血清SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.3.2肝臟SOD指標比較:四組小鼠肝臟SOD水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟SOD水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組肝臟SOD水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2小鼠血清和肝臟GSH-Px指標水平比較:2.1 GSH-Px指標1小時時刻比較:2.1.1血清GSH-Px指標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清GSH-Px水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組血清GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.1.2肝臟GSH-Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟GSH-Px水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而模型組肝臟GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組肝臟GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2 GSH-Px指標6小時時刻比較:2.2.1血清GSH-Px指標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清GSH-Px水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);空白組血清GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2.2肝臟GSH-Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組肝臟GSH-Px水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);空白組GSH-Px水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P均0.05);Gln低劑量組肝臟GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.3 GSH-Px指標12小時時刻比較:2.3.1血清GSH-Px指標比較:四組小鼠血清GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清GSH-Px水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.3.2肝臟GSH-Px指標比較:四組小鼠肝臟GSH-Px水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟GSH-Px水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清GSH-Px水平和Gln高劑量組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3小鼠血清和肝臟MDA指標水平比較:3.1 MDA指標1小時時刻水平比較:3.1.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清MDA水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組血清MDA水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.1.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟MDA水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而模型組肝臟MDA水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組肝臟MDA水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.2 MDA指標6小時時刻水平比較:3.2.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);MDA水平差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.2.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組肝臟MDA水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組肝臟MDA水平與Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05),Gln低劑量組肝臟MDA水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.3 MDA指標12小時時刻水平比較:3.3.1血清MDA指標比較:四組小鼠血清MDA水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組血清MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05);Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P均0.05)。3.3.2肝臟MDA指標比較:四組小鼠肝臟MDA水平相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進行兩兩比較,模型組肝臟MDA水平與空白組、Gln低劑量組和Gln高劑量組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05);Gln低劑量組血清MDA水平和Gln高劑量組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:膿毒癥能夠?qū)е滦∈蟀l(fā)生氧化損傷和氧化應激,而谷氨酰胺能夠提高小鼠體內(nèi)抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量,提高其抗氧化能力。谷氨酰胺可使小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA的水平降低,從而降低有毒代謝產(chǎn)物水平,減輕氧化應激損傷,最終對機體起到保護作用。本研究發(fā)現(xiàn)Gln高劑量組和Gln低劑量組對小鼠發(fā)生氧化損傷的保護作用無差別。

【關鍵詞】:
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R459.7
【目錄】:

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  本文關鍵詞:谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激作用效果的研究,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



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