本文關(guān)鍵詞：脂多糖對(duì)小鼠心肌TMEM16A表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：全身炎癥反應(yīng)綜合征（Systemic Inflammatory Response Syn-drome, SIRS）是指感染或非感染因素作用于機(jī)體而引起的一種難以控制的全身性瀑布式炎癥反應(yīng)綜合征。SIRS發(fā)生時(shí)，循環(huán)系統(tǒng)是較易受影響及損害的系統(tǒng)之一，患者可以表現(xiàn)出不同程度的心功能障礙及心臟相關(guān)生化指標(biāo)升高。而肺是炎癥損傷的最先靶器官，已有研究證明SIRS是急性肺損傷（Acute Lung Injury, ALI）發(fā)生的基礎(chǔ)。病理證實(shí)ALI的存在可以作為SIRS模型建立成功的標(biāo)志。氯離子通道是廣泛分布的一種陰離子通道，其中鈣激活氯通道（Calcium-activated Chloride Channels, CaCCs）是心肌主要的氯離子通道之一，在正常心肌細(xì)胞的生理功能中有重要作用，與心肌細(xì)胞的電活動(dòng)有密切關(guān)系，病理情況下可導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。而跨膜蛋白16A（TMEM16A）作為構(gòu)成CaCCs的分子基礎(chǔ)，其在小鼠心肌組織的表達(dá)已被證實(shí)。本研究旨在應(yīng)用脂多糖（Lipopolysaccharides, LPS）建立小鼠全身炎癥反應(yīng)綜合征的模型，觀察TMEM16A在心肌組織表達(dá)的變化。 方法： 1全身炎癥反應(yīng)動(dòng)物模型的建立：健康雄性C57BL/6小鼠24只，年齡8-12周，體重20-25g。隨機(jī)分為對(duì)照組、輕度炎癥組及SIRS組，每組8只小鼠，通過腹腔注射LPS（500ug/kg）建立輕度炎癥模型，腹腔注射LPS（10mg/kg）建立SIRS模型，，對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水。 224小時(shí)后，觀察各組小鼠一般狀態(tài)。眼球取血，分離血清，應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)cTnI、CK-MB、和BNP的濃度。步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行，分別計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程，將樣品光密度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，計(jì)算樣品中cTnI、CK-MB和BNP濃度。 3麻醉并處死小鼠，分別取肺組織及心肌組織，肺組織及部分心肌組織用10%中性福爾馬林固定，余心肌組織液氮罐保存。肺組織經(jīng)HE染色及光鏡檢查，觀察有無(wú)ALI病理特點(diǎn)，確定SIRS模型是否建立成功。福爾馬林固定的心肌組織通過HE染色觀察各組心肌組織的病理特點(diǎn)，另通過免疫組織化學(xué)染色觀察其TMEM16A表達(dá)情況。液氮保存的心肌組織經(jīng)蛋白提取，行BCA蛋白濃度測(cè)定及蛋白質(zhì)印跡（Western Blot），觀察組間TMEM16A表達(dá)差異及有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1對(duì)照組小鼠活動(dòng)、進(jìn)食等無(wú)異常，暴露肺臟后未見腫大、出血等。輕度炎癥組小鼠活動(dòng)及進(jìn)食較對(duì)照組減少，肉眼觀察肺臟無(wú)明顯異常。SIRS組小鼠活動(dòng)明顯減少，出現(xiàn)嗜睡、厭食等，肉眼觀察肺臟可見體積增大，表面可見點(diǎn)灶狀出血。 2輕度炎癥組肺組織HE染色在光鏡下示：部分肺泡腔狹窄，肺泡壁增厚，肺間質(zhì)可見紅細(xì)胞及粒細(xì)胞浸潤(rùn)。SIRS組肺組織HE染色示：肺泡壁結(jié)構(gòu)破壞，肺間質(zhì)大量紅細(xì)胞及粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡內(nèi)可見較多滲出。上述改變符合急性肺損傷病理特點(diǎn)，SIRS模型建立成功。 3心肌組織免疫組織化學(xué)染色可見TMEM16A表達(dá)，且輕度炎癥組及SIRS組較對(duì)照組表達(dá)量多，而SIRS組表達(dá)高于輕度炎癥組。 4與對(duì)照組小鼠相比，輕度炎癥組及SIRS組血清cTnI及CK-MB濃度明顯增高（P0.05），其中SIRS組又明顯高于輕度炎癥組（P0.05）。血清BNP濃度輕度炎癥組與對(duì)照組小鼠相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），但SIRS組BNP濃度明顯高于對(duì)照及輕度炎癥組（P0.05）。 5Western Blot觀察TMEM16A在各組心肌均有表達(dá)（, n=3)。與對(duì)照組小鼠相比，輕度炎癥組心肌TMEM16A表達(dá)升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；SIRS組TMEM16A的表達(dá)明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05） 結(jié)論： 1小鼠腹腔注射脂多糖（10mg/kg）可成功建立SIRS模型。 2全身炎癥反應(yīng)時(shí)，血清cTnI、CK-MB及BNP濃度升高，表明存在心肌細(xì)胞損傷。輕度炎癥時(shí)血清cTnI及CK-MB濃度升高，但血清BNP濃度變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明輕度炎癥時(shí)也可能存在心肌細(xì)胞損傷。 3TMEM16A在心肌組織有所表達(dá)。在全身炎癥反應(yīng)綜合征時(shí)，心肌組織TMEM16A的表達(dá)明顯升高。說(shuō)明鈣激活氯離子通道在可能與全身炎癥反應(yīng)時(shí)患者心肌損傷有關(guān)。全身炎癥反應(yīng)綜合征時(shí)鈣激活氯離子通道表達(dá)異常是否與可能出現(xiàn)的心律失常有關(guān)有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1252376