本文關(guān)鍵詞：大鼠急性甲醇中毒腦組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及意義

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【摘要】：目的：復(fù)制急性高劑量、低劑量甲醇中毒大鼠模型,檢測大鼠甲醇中毒后腦組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)變化,從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)層面探討大鼠急性甲醇中毒后腦組織MCP-1和VEGF的變化規(guī)律,為急性甲醇中毒的病理學(xué)研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：90只成年健康SD (Sprague-Dawley)大鼠,不限雌雄、體重(280-±30)g。45只用于腦組織RNA和蛋白的提取,45只用于免疫組化實(shí)驗(yàn)。大鼠分為低劑量組、高劑量組和生理鹽水組,給予各組大鼠吸入等比混合氣體(N2O/O2),并分別灌胃低劑量甲醇溶液(1g/kg)、高劑量甲醇溶液(2g/kg)或生理鹽水,各組又隨機(jī)分成2h,12h,24h,3d,1w五個時間點(diǎn)(n=6)。右心耳取血,采用氣相色譜法檢測大鼠血液的甲醇濃度,然后取3只進(jìn)行灌注固定,石蠟包埋切片和免疫組化染色；取3只斷頭處死,取大鼠腦皮層組織分別進(jìn)行總RNA和蛋白的提取�？俁NA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后對MCP-1和VEGF兩個目的基因的mRNA的表達(dá)進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR分析,用Western blot對MCP-1和VEGF的蛋白表達(dá)變化進(jìn)行定量分析。 結(jié)果：1.甲醇濃度檢測結(jié)果：高劑量組在2h、12h、24h三個時間點(diǎn)的血液甲醇濃度與低劑量組和生理鹽水組比較顯著升高(p0.05),低劑量組在2h、12h兩個時間點(diǎn)的血液甲醇濃度與生理鹽水組比較顯著升高(p0.05)。高劑量組和低劑量組在3d和1w及生理鹽水組各時間點(diǎn)均未檢測出甲醇,證明大鼠吸入混合氣體(N20/02)并給予高、低劑量甲醇溶液灌胃后能夠成功復(fù)制急性高、低劑量甲醇中毒大鼠模型。2.實(shí)時熒光定量PCR檢測結(jié)果：①急性甲醇中毒后低劑量組和高劑量組不同時間點(diǎn)腦組織MCP-1mRNA表達(dá)均發(fā)生顯著變化。2h明顯升高(p0.05),24h達(dá)高峰,然后逐漸下降,但3d和1w仍高于對照組,差異有顯著性(p0.05)。高劑量組MCP-1mRNA的表達(dá)水平在2h、3d和1w顯著高于低劑量組(p0.05),兩組在12h和24hMCP-1mRNA的表達(dá)無顯著差異(p0.05)。②急性甲醇中毒后低劑量組和高劑量組不同時間點(diǎn)腦組織VEGFmRNA表達(dá)均發(fā)生顯著變化。2h明顯升高(p0.05),24h達(dá)高峰,24h后開始逐漸下降,3d和1w仍高于對照組,有顯著性差異(p0.05)。高劑量組VEGF mRNA表達(dá)水平在2h和12h高于低劑量組(p0.05),其余時間點(diǎn)高、低劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.Western blot檢測結(jié)果：①急性甲醇中毒后低劑量組和高劑量組MCP-1蛋白表達(dá)在12h明顯升高(p0.01),24h達(dá)高峰,然后逐漸下降,3d仍高于對照組(p0.01)。高劑量組MCP-1蛋白表達(dá)在12h和24h高于低劑量組(p0.05),兩組在3d MCP-1的蛋白表達(dá)無顯著差異(p0.05)。②急性甲醇中毒后低劑量組和高劑量組VEGF蛋白表達(dá)在12h顯著升高達(dá)到高峰(p0.01),24h和3d與12h相比有所降低,但仍明顯高于對照組(p0.01),高劑量組VEGF蛋白表達(dá)在12h、24h和3d顯著高于低劑量組(p0.01)。4.免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①對照組大鼠大腦未見明顯MCP-1陽性表達(dá),急性甲醇中毒后,高劑量組24h MCP-1陽性表達(dá)數(shù)增加,3d達(dá)高峰,和對照組相比有顯著差異(p0.01),陽性表達(dá)多集中在基底節(jié)和梨狀皮質(zhì),1w陽性反應(yīng)減少,但與對照組相比仍有顯著差異(p0.01)。②對照組大鼠大腦有少量陽性VEGF表達(dá),急性甲醇中毒后,高劑量組24h VEGF陽性表達(dá)數(shù)顯著增多(p0.01),陽性反應(yīng)增強(qiáng),3d達(dá)高峰,陽性表達(dá)主要集中在大腦皮質(zhì),1w陽性表達(dá)數(shù)減少,但和對照組相比仍有顯著差異(p0.01)。 結(jié)論：大鼠急性甲醇中毒后,腦組織MCP-1和VEGF基因和蛋白表達(dá)顯著增高并持續(xù)一定時期,可能參與了腦組織病理變化過程,程度與甲醇中毒劑量有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：甲醇中毒 單核細(xì)胞趨化蛋白-1 血管內(nèi)皮生長因子 大鼠
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R595.6
【目錄】：

• 主要縮略語英文索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-36
• 討論36-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 文獻(xiàn)綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 研究生期間撰寫及發(fā)表文章53-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1125347