本文關(guān)鍵詞：缺氧預(yù)處理對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層組織HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的（1）建立一種穩(wěn)定、可靠的大鼠缺氧預(yù)處理動(dòng)物模型；（2）探究創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層腦組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白-1(Glucose transporter-1, GLUT-1）和GLUT-3的表達(dá)，并分析HIF-1α分別與GLUT-1和GLUT-3mRNA及蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性；（3）探討缺氧預(yù)處理對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層腦組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響以及可能的相關(guān)機(jī)制，為缺氧預(yù)處理預(yù)防和治療創(chuàng)傷性腦損傷提供相關(guān)理論依據(jù)。 方法204只健康清潔級(jí)成年雄性SD大鼠，體重介于250g~300g之間（安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）。隨機(jī)分為單純對(duì)照組（CON組，n=12）、單純外傷組（TBI組，n=96）和缺氧預(yù)處理后外傷組（HPCT組，n=96）。TBI組和HPCT組按取材時(shí)間點(diǎn)不同又隨機(jī)分為傷后1、4、8、12h和1、3、7、14d組，每組12只。HPCT組大鼠先置于低壓氧艙內(nèi)，用真空抽氣泵和進(jìn)出氣閥門將艙內(nèi)大氣壓維持在50.47kPa，每天連續(xù)預(yù)處理3h，處理完后將大鼠置于常壓環(huán)境中進(jìn)行復(fù)氧，共預(yù)處理3d。預(yù)處理結(jié)束后1d，HPCT組和TBI組大鼠用自由落體打擊法制作TBI模型：大鼠用10%水合氯醛（500mg/kg）腹腔注射麻醉后，將其置于立體定位儀上，碘伏消毒后沿正中線切開(kāi)頭皮，分離皮下組織及骨膜并暴露顱骨，在人字縫前3.0mm，矢狀縫向右旁開(kāi)3.0mm處用磨鉆鉆穿顱骨，形成直徑約5mm骨窗，保持硬膜完整，用自由落體打擊裝置打擊暴露部位（打擊重量為50g，直徑為3.5mm，打擊高度距離創(chuàng)面為25cm）。打擊后縫合頭皮，醒后自由進(jìn)食。各組動(dòng)物模型分別于傷后1、4、8、12h和1、3、7、14d各時(shí)間點(diǎn)處死。其中6只直接處死，冰上斷頭取腦，，留取挫傷灶周圍0.5cm皮層腦組織，并分別采用行RT-PCR和Western blot檢測(cè)HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3mRNA及蛋白的表達(dá)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另6只心臟灌注4％多聚甲醛后，斷頭取腦，腦組織浸泡于4％多聚甲醛固定，脫水、石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚5μm，供免疫組化檢測(cè)傷后皮層組織HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3的分布情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果（1）致傷動(dòng)物當(dāng)日死亡5只，其中TBI組4只，HPCT組1只，給予重新造模補(bǔ)充。其余均于傷后4-5h清醒，醒后食欲差，精神萎靡，活動(dòng)量減少，發(fā)生癲癇4只、肢體癱瘓2只，至傷后第3日因不能進(jìn)食死亡3只，給予重新造模補(bǔ)充，最終進(jìn)入結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)大鼠為204只。 （2）RT-PCR檢測(cè)結(jié)果提示：與CON組相比，TBI組HIF-1α、GLUT-1和GLUT-3mRNA均在傷后4h升高，12h達(dá)高峰，7d基本恢復(fù)至接近正常（P0.05）；但HPCT組HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3mRNA的表達(dá)在傷后1h即增強(qiáng)，傷后4h至7d HIF-1α、GLUT-1和GLUT-3表達(dá)量較TBI組均明顯增加，直至傷后14d逐漸降至接近C組水平，相關(guān)性分析表明HIF-1α分別與GLUT-1、GLUT-3mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （3）Western blot檢測(cè)結(jié)果提示：TBI組和CON組相比，傷后4h、8h、12h、1d和3d HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3蛋白的表達(dá)均明顯增加(P0.05)；HPCT組與TBI組比較，HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3蛋白的表達(dá)在傷后1h即開(kāi)始增加，4h、8h、12h依次增高，傷后1d達(dá)高峰，隨后逐漸下降，直至傷后14天降至接近正常水平相關(guān)性分析表明HIF-1α分別與GLUT-1、GLUT-3蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （4）免疫組化結(jié)果提示：細(xì)胞中HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)主要定位于神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)、GLUT-1陽(yáng)性表達(dá)主要定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，GLUT-3陽(yáng)性表達(dá)主要定位神經(jīng)元胞膜上。TBI組各時(shí)間點(diǎn)均有陽(yáng)性表達(dá)，傷后4h陽(yáng)性表達(dá)逐漸增加，1d達(dá)到高峰，隨后逐漸開(kāi)始下降，直至7d逐漸恢復(fù)至接近CON組水平（P0.05）。與TBI組相比，HPCT組在傷后1h表達(dá)即開(kāi)始增加，傷后1d達(dá)高峰，隨后逐漸下降，直至傷后14天降至接近正常水平。各組陽(yáng)性率相關(guān)性分析表明HIF-1α分別與GLUT-1、GLUT-3蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論（1）本次缺氧預(yù)處理大鼠模型及創(chuàng)傷性腦損傷模型穩(wěn)定性較好。（2）TBI傷后腦組織HIF-1α、GLUT-1及GLUT-3mRNA及蛋白的表達(dá)增加，且相關(guān)性分析表明HIF-1α分別與GLUT-1、GLUT-3mRNA及蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，提示HIF-1α可能參與創(chuàng)傷性腦損傷后皮層組織GLUT-1和GLUT-3的表達(dá)。（3）缺氧預(yù)處理可通過(guò)誘導(dǎo)皮層腦組織HIF-1α的表達(dá)，上調(diào)皮層組織GLUT-1和GLUT-3mRNA及蛋白的表達(dá)，增加傷后腦組織對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，相對(duì)減輕腦組織能量代謝障礙，可能是預(yù)防和治療顱腦損傷后能量代謝紊亂的有效措施之一。
【關(guān)鍵詞】：缺氧預(yù)處理 顱腦損傷 HIF-1α GLUT-1 GLUT-3
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層組織 HIF-1α、GLUT-1 及 GLUT-3 表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究14-35
• 1 材料與方法14-28
• 2 結(jié)果28-32
• 3 討論32-33
• 4 結(jié)論33-35
• 第二部分 缺氧預(yù)處理對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層組織 HIF-1α、GLUT-1 31及 GLUT-3 表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究35-50
• 1 材料與方法35-42
• 2 結(jié)果42-47
• 3 討論47-48
• 4 結(jié)論48-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 附錄54-55
• 致謝55-56
• 綜述56-65
• 參考文獻(xiàn)62-65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王亮;陳亮;李東;唐文淵;;創(chuàng)傷性腦損傷急性期高血糖對(duì)腦GLUT-3表達(dá)的影響[J];中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志;2010年06期

本文編號(hào)：1033023