本文關(guān)鍵詞：高表達VCAM-1對間充質(zhì)干細胞體外遷移特性的影響

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【摘要】：目的：利用本實驗室前期獲得的穩(wěn)定過表達血管細胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)的間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells, MSC)作為研究對象,研究VCAM-1基因在MSC中過表達對其形態(tài)、生長特性及體外定向移動等特性的作用,為優(yōu)化MSC臨床應用提供依據(jù)。方法：將基因修飾高表達VCAM-1的小鼠MSC(C2H10T1/2-VCAM-1)、轉(zhuǎn)染空載體的小鼠MSC(C3H10 T1/2-MIGR1)和正常小鼠MSC(C3H10 T1/2)三種細胞分別接種在6孔板中,采用姬姆薩染色的方法研究各組細胞外形特點的變化；將C2H10T1/2-VCAM-1、C3H10T1/2-MIGR1和C3H10 T1/2三種細胞分別接種于48孔板中,采用CCK8方法監(jiān)測三種細胞在多個不同時間點的光密度值,探究過表達VCAM-1對MSC生長特性的影響；分別提取C2H10T1/2-VCAM-1、 C3H10T1/2-MIGR1和C3H10T1/2三種細胞胞漿蛋白,BCA法測量蛋白濃度,采用蛋白質(zhì)印跡法研究過表達VCAM-1對MAPK(p38/MAPK、ERK/MAPK及JNK/MAPK)信號通路的影響作用,采用transwell培養(yǎng)體系,將C2H10T1 /2-VCAM-1、C3H10T1 /2-MIGR1)和C3H10T1/2分別接種在孔徑為8 μm的transwell培養(yǎng)板上面,取優(yōu)質(zhì)FBS為趨化物誘導MSC移動。待細胞移動8小時和12小時之后,采用結(jié)晶紫和DAPI對transwell培養(yǎng)半透膜下的MSC進行染色,而后計量每組MS C的遷移細胞數(shù)目并計算遷移效率。深入實驗,將MAPK信號通路的阻斷劑(SB203580, PD98059和JNK inhibitor Ⅱ)混入進trans well培養(yǎng)體系內(nèi),記錄各組MSC移動能力的變化。結(jié)果：VCAM-1基因轉(zhuǎn)染后,MSC形態(tài)無顯著改變。過表達VCAM-1的MSC相比MSC和轉(zhuǎn)染空載體的MSC,生長速度最慢,存活細胞數(shù)目最少。經(jīng)過8h和12h的transwell體系培養(yǎng),轉(zhuǎn)染高表達VCAM-1的C2H10T1/2-VCAM-1遷移的細胞數(shù)(7467±485,8795±255)和遷移率(14.9%±1%,17.6%±0.5%)均顯著高于正常組C3H10T1/2(2731±562,4779±224；5.5%±1.1%,9.6%±0.4%)和轉(zhuǎn)染空載體組C3H10T1/2-MIGR1 (2539±321,5645±1080；5.1%±0.6%,11.3% ±1.1%)(P0.05),且正常組和轉(zhuǎn)染空載體組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05)；加入JNK/MAPK通路抑制劑JNK inhibitor Ⅱ可顯著抑制VCAM-1對MSC的促遷移作用,遷移的MSC細胞數(shù)(4843±167)和遷移率(9.7%±0.3%)均較其它兩組顯著降低(P0.05)。但p38/MAPK信號通路的阻斷劑SB203580及ERK/MAPK信號通路的阻斷劑PD98059則對高表達VCAM-1的MSC移動能力無顯著改變(P0.05)。結(jié)論:VCAM-1基因轉(zhuǎn)染與否,對MSC能否維持原有的形態(tài)不會有影響。過表達VCAM-1的MSC相比C3H10T1/2-MIGR1和C3H10T1/2,增殖速度最慢,過表達VCAM-1會抑制MSC的生長。高表達VCAM-1會促進小鼠MSC的體外遷移,這可能與JNK/MAPK通路的改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：血管細胞粘附分子1 間充質(zhì)干細胞 體外遷移 MAPK通路
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-7
• 縮略詞表7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-23
• 實驗結(jié)果23-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-41
• 相關(guān)綜述41-48
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 碩士期間發(fā)表論文49

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本文編號：979608