本文關鍵詞：抗VEGFR-2全人源IgG1抗體的構建及其在CHO-k細胞中的表達

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【摘要】：本文在實驗室構建的單鏈抗體-Fc融合抗體[scFv(AK404R)-Fc]的基礎上構建抗VEGFR-2全人源IgG1樣全長抗體(Mab-04)。利用重疊PCR,獲得Mab-04的輕鏈和重鏈的核酸序列后分別克隆到真核表達載體pcDNA3.1,獲得重組質(zhì)粒。脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉染至CHO-k細胞,經(jīng)Protein A柱純化細胞培養(yǎng)上清液獲得目的蛋白,利用Western blotting檢測目的蛋白,ELISA檢測Mab-04與抗原親和力。測序表明重組質(zhì)粒構建成功,Western blotting檢測顯示目的蛋白成功表達(1μg·mL-1),ELISA檢測闡明該抗體能與抗原結合并呈濃度依賴性(IC50為50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表達并正確裝配,為進一步大量制備該抗體及其活性研究打下基礎。
【作者單位】： 中國藥科大學天然藥物活性組分與藥效國家重點實驗室 生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： VEGFR- 全長抗體 抗腫瘤血管生成
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81072561,81102364) 天然藥物活性組分與藥效國家重點實驗室資助項目(JKGP201101) 江蘇省青藍工程項目(2010)
【分類號】：R392
【正文快照】： 血管生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的必要條件,而血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factorreceptor,VEGFR)作為血管生成關鍵因子VEGF的受體也成為抗腫瘤藥物的靶向研究熱點[1]。VEGFR有3種亞型:Flt1(VEGFR-1)、KDR(VEGFR-2)、VEGFR-3,其中VEGFR-2與VEGF具有高親和力

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本文編號：950004