本文關(guān)鍵詞：攜帶eGFP基因慢病毒顆粒的制備及鑒定

  更多相關(guān)文章： 增強(qiáng)綠色熒光蛋白 慢病毒顆粒 包裝 細(xì)胞 表達(dá)

【摘要】：目的:通過(guò)eGFP基因慢病毒顆粒的包裝和感染,明確重組慢病毒對(duì)外源基因在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。方法:把慢病毒質(zhì)粒Lv105-eGFP轉(zhuǎn)染到293 Ta細(xì)胞中并包裝為慢病毒顆粒,經(jīng)電鏡檢測(cè)病毒顆粒和實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)測(cè)定病毒滴度,之后感染H1299細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡觀察比較eGFP在靶細(xì)胞中的表達(dá)效率。結(jié)果:eGFP在包裝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率在48h時(shí)達(dá)90%以上,到72h時(shí)細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)逐漸顯著;電鏡檢測(cè)可看到典型的慢病毒顆粒形態(tài)特征;病毒原液的滴度是4.4×107VG/mL、濃縮液的是2.68×1010VG/mL;1μL病毒原液感染H1299細(xì)胞時(shí),eGFP表達(dá)水平可達(dá)10%、增加到100μL感染時(shí)表達(dá)水平達(dá)到99%以上,證明eGFP基因得到有效轉(zhuǎn)導(dǎo)并可在細(xì)胞中高水平表達(dá)綠色熒光蛋白。結(jié)論:成功包裝了eGFP慢病毒顆粒并可在靶細(xì)胞中獲得高效表達(dá)。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 增強(qiáng)綠色熒光蛋白 慢病毒顆粒 包裝 細(xì)胞 表達(dá)
【基金】：協(xié)和青年科研基金項(xiàng)目(“hFGF21對(duì)Ⅱ型糖尿病的靶向基因治療研究”,2012D14)資助 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目(“抵抗素與飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病獼猴模型的關(guān)聯(lián)性研究”,2009ZC185M)資助
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 0引言目前進(jìn)行基因治療較為常用的病毒載體是Ad和AAV等[1,2],但都只能實(shí)現(xiàn)治療基因的瞬時(shí)表達(dá),難以形成穩(wěn)定表達(dá)而發(fā)揮長(zhǎng)效功能。慢病毒載體(Lentiviral vectors)是以人類免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus1,HIV-1)來(lái)源為主要代表改造而來(lái)的一類病毒載體,攜帶有外

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳澤;林冬;王敏;;PIG7慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[J];生物技術(shù);2006年04期

2 胡雄貴;肖定福;鄧緣;燕海峰;;利用Gateway技術(shù)構(gòu)建慢病毒載體及其在雞囊胚細(xì)胞中的表達(dá)[J];生物技術(shù);2007年04期

3 張敬之;郭歆冰;謝書陽(yáng);朱怡文;黃英;王舒;任兆瑞;;用慢病毒載體介導(dǎo)產(chǎn)生綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2006年05期

4 朱華宇;張翔;張曉;張瑞;楊安鋼;;miR-203真核表達(dá)載體的構(gòu)建和重組慢病毒的制備及其對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉吉宏;李峰;郝子悅;李碧春;陳學(xué)進(jìn);;慢病毒載體法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年02期

2 尹春光;杜立新;;慢病毒載體構(gòu)建策略及生物安全性研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年02期

3 邵敬偉;董海燕;王濤;;攜綠色熒光蛋白和調(diào)控元件的人胰島素原基因在HepG2細(xì)胞的表達(dá)[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

4 董海燕;陳劍鋒;邵敬偉;王濤;;高效轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用[J];福州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年06期

5 張蕊;龔道清;;慢病毒載體的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年06期

6 孫克寧;朱化彬;林峰;王棟;郝海生;杜衛(wèi)華;趙學(xué)明;;慢病毒載體的構(gòu)建及其應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年08期

7 黃黎珍;劉光澤;顧為望;;慢病毒載體法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究進(jìn)展[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué);2007年01期

8 張帆;張敬之;;HIV-1載體的研發(fā)沿革[J];生命科學(xué);2010年03期

9 馬海燕;方_g聃;張敬之;;應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)重組慢病毒滴度及其感染效率[J];生命科學(xué)研究;2009年05期

10 蘇勝?gòu)?陳為先;馬佳璐;張勇;胡鵬晨;聞劍e，

本文編號(hào)：937256