本文關鍵詞：應用含內參的多重實時熒光RT-PCR方法快速檢測登革病毒和基孔肯雅病毒

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【摘要】：目的建立一種登革病毒、基孔肯雅病毒并含人類基因內參檢測的多重實時熒光RT-PCR方法,能在同一反應管內同時檢測目前發(fā)現(xiàn)的所有來源的登革病毒或基孔肯雅病毒。方法針對登革病毒3′端非編碼區(qū)和基孔肯雅病毒結構蛋白E2-6K-E1區(qū)以及人體各類組織細胞中均能穩(wěn)定表達的RNAse P基因,設計了3套特異性引物和探針,建立了1套能同時檢測登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人類基因檢測內參的多重實時熒光RT-PCR方法,對其靈敏性和特異性進行了驗證,并對臨床發(fā)熱病人標本進行了應用評估。結果該方法對檢測體外轉錄合成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的靈敏性可達最低每個反應10～100拷貝,對檢測登革1型病毒和基孔肯雅病毒的靈敏性分別可達最低每個反應0.1TCID50/mL和1TCID50/mL。用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本腦炎病毒、西尼羅病毒、黃熱病毒、蓋塔病毒、辛德畢斯病毒各1株進行檢測,方法的特異性均為100%。方法應用于189份發(fā)熱病人血清標本檢測,可準確地鑒定出其中登革病毒或基孔肯雅病毒核酸陽性的標本,且所有血清標本均能被內參引物和探針有效地擴增和雜交。結論本研究建立了一種高靈敏性、高特異性且含人類基因內參檢測的登革病毒和基孔肯雅病毒多重實時熒光RT-PCR檢測方法,可作為登革熱或基孔肯雅熱病人早期快速鑒別診斷的有效工具,也可用于蚊媒攜帶登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速篩查。
【作者單位】： 廣東檢驗檢疫技術中心;廣東省疾病預防控制中心;
【關鍵詞】： 登革病毒 基孔肯雅病毒 內參 多重實時熒光RT-PCR
【基金】：質檢公益性行業(yè)科研專項基金資助項目(No.201010036)~~
【分類號】：R373.3
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)屬黃病毒科黃病毒屬成員,有四種血清型,可通過蚊類叮咬人而傳播,四種血清型登革病毒均可引起登革熱、登革出血熱甚至登革休克綜合征等不同危害程度的疾病。基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)屬于披膜病毒科甲病毒屬,可引起人類發(fā)生與登革熱

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