本文關(guān)鍵詞：人精子肌動蛋白樣蛋白7a蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)的表達純化及多克隆抗體制備

  更多相關(guān)文章： ACTLa 原核表達 多克隆抗體

【摘要】：目的在大腸桿菌系統(tǒng)表達并純化人精子肌動蛋白樣蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制備兔抗ACTL7a多克隆抗體。方法構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),篩選陽性重組菌,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達,通過鎳離子金屬螯合樹脂和谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B樹脂兩次親和純化和分子篩分離目的蛋白;以表達的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西蘭大白兔,制備抗ACTL7a的多克隆抗體。ELISA檢測抗體效價,Western blot法鑒定抗體特異性,免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)檢測ACTL7a在曲精小管細(xì)胞的表達。結(jié)果經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在大腸桿菌中表達出目的蛋白ACTL7a(1-70),純化后免疫新西蘭大白兔,成功獲得抗血清。血清效價達到1:160000以上,且具有良好的特異性。結(jié)論成功構(gòu)建了ACTL7a基因的原核表達載體,并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達,經(jīng)純化獲得高純度的目的蛋白;制備出兔抗ACTL7a抗體,效價及特異性均良好。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點實驗室 生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： ACTLa 原核表達 多克隆抗體
【基金】：國家科技支撐計劃(2012BAI31B08) 國家重點實驗室專項基金(2060204)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 精子發(fā)生是生物體內(nèi)非常復(fù)雜的過程之一。小鼠中大約4%的基因組是特異表達在生殖細(xì)胞中,其中大多數(shù)是在減數(shù)分裂后具有活性[1]。通過cDNA芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)有101個基因可能涉及到調(diào)節(jié)精子發(fā)生過程[2]。1 652個基因在減數(shù)分裂開始時的轉(zhuǎn)錄豐度明顯增加,351(20%)個基因只在雄性生殖

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 付俊;繆時英;;小鼠睪丸曲細(xì)精管生精上皮的分離及形態(tài)觀察[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2011年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳曉e，

本文編號：842197