本文關(guān)鍵詞：IFITM2的克隆表達(dá)及其抗病毒作用初探

  更多相關(guān)文章： IFITM 克隆表達(dá) 抗病毒作用

【摘要】：目的:構(gòu)建含有ifitm2基因的重組質(zhì)粒,在人胚腎HEK293T細(xì)胞中表達(dá),并驗(yàn)證IFITM2蛋白的抗病毒作用。方法:參照Genbank ifitm2基因序列,設(shè)計(jì)上下游引物,通過RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增ifitm2基因,并將擴(kuò)增產(chǎn)物連接至pMD18-T-sim-ple載體上,目的基因測序正確后進(jìn)一步亞克隆至真核表達(dá)載體pVAX1上,轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,通過RT-PCR,蛋白免疫印跡(Western blot)和激光共聚集顯微鏡(LCSM)驗(yàn)證外源基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。同時(shí)HEK293T細(xì)胞過表達(dá)IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染細(xì)胞,通過Western blot檢測IFITM2蛋白對病毒的抑制作用。結(jié)果:成功獲得ifitm2基因,測序正確,將其連接到pVAX1載體中,經(jīng)酶切鑒定,證明含有ifitm2基因的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能夠在HEK293T細(xì)胞中表達(dá),且呈廣泛分布。過表達(dá)IFITM2蛋白后,熒光蛋白分析表明,該蛋白對病毒感染具有一定的抑制作用。結(jié)論:成功構(gòu)建了含有ifitm2基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒,該質(zhì)粒可以在真核細(xì)胞中得到有效表達(dá),且對VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,該研究為進(jìn)一步探討IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)及理論基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所 省部共建人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： IFITM 克隆表達(dá) 抗病毒作用
【基金】：973計(jì)劃前期研究專項(xiàng)課題( No.2011CB512110) 中國博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目( No.20110491803、No.2012T50859)
【分類號】：R392
【正文快照】： 干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白(Interferon inducedtransmembrane proteins,IFITMs)是在干擾素刺激后產(chǎn)生的一組蛋白,其家族成員包括4個(gè)序列高度相關(guān)的膜表面蛋白,即IFITM1、IFITM2、IFITM3和IF-ITM5,它們均在細(xì)胞生長的不同階段發(fā)揮一定的生物學(xué)功能[1,2],Friedman等[3]在1984年首先

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱娜;李昌;郭焱;李沂;孫丹丹;任靜強(qiáng);杜壽文;秦艷青;王茂鵬;田宇飛;金寧一;;IFITM3基因的克隆及其在真核細(xì)胞中的表達(dá)與定位研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2012年11期

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李沂;IFITM1\2\3的克隆表達(dá)及其抗病毒作用研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊雯;萬孝玲;田春林;王衛(wèi)群;劉曉泉;;弓形蟲表面抗原SAG4基因的克隆、表達(dá)和鑒定[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2009年04期

2 林平;鄒海峰;于靖;邊淑玲;劉紫君;于曉光;;降鈣素基因相關(guān)肽衍生物克隆表達(dá)與活性鑒定[J];中國老年學(xué)雜志;2008年18期

3 張燁;于在江;黃捷勤;唐啟慧;陳禹保;辛麗;陳永坤;舒躍龍;;流感病毒H3N2血凝素基因和神經(jīng)氨酸酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年01期

4 邵惠訓(xùn);《流感煎劑》在雞胚內(nèi)抗流感病毒的試驗(yàn)[J];北京醫(yī)學(xué);1980年04期

5 李杰,徐淑蘭,朱燕,王們,李芳才,侯金玲;退熱寧的抗菌、抗病毒作用研究[J];山東醫(yī)藥工業(yè);2000年04期

6 黃海;馮美卿;孫傳文;徐樹光;普俊學(xué);周s，

本文編號：805787