本文關(guān)鍵詞：HGF及G-CSF誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為肝樣細(xì)胞

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【摘要】：背景與目的：目前慢性肝病的患者眾多，若未加干預(yù)，很多慢性肝病會(huì)發(fā)展為終末期肝病，一旦發(fā)展為終末期肝病，常規(guī)的治療效果不理想，唯一療效確切的是原位肝移植（Orthotopic livertransplantation,OLT），術(shù)后生存率一年為85%~90%，三年生存率75%~80%，但原位肝移植存在肝源不足，而且費(fèi)用昂貴，以及移植后的免疫排斥反應(yīng)等因素制約了它的發(fā)展，尋找一種新的方法治療終末期肝病顯得特別的重要。關(guān)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrowmesenchymal stem cells，BM-MSCs）方面的研究成為了近年來(lái)干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)，在一定的條件下BM-MSCs可以向骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞等分化。BM-MSCs存在于骨髓中，取材方便，容易培養(yǎng)，生長(zhǎng)旺盛，免疫原性低，不存在倫理問(wèn)題，是理想的干細(xì)胞移植的種子細(xì)胞。另外，國(guó)內(nèi)外大量的文獻(xiàn)報(bào)道肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Hepatocyte growth factor，HGF）被廣泛用于肝相關(guān)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究，可調(diào)控BM-MSCs分化為肝細(xì)胞。粒細(xì)胞集落刺激因子（granlocyte-colony stimulating factor，G-CSF)是一個(gè)大小為20-Ku的糖蛋白，有文獻(xiàn)報(bào)道G-CSF體外培養(yǎng)BM-MSCs通過(guò)ILISA檢測(cè)到HGF水平，還有報(bào)道培養(yǎng)液中加入了G-CSF能提高BM-MSCs活性。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討HGF以及G-CSF可否誘導(dǎo)大鼠BM-MSCs分化為肝樣細(xì)胞，為干細(xì)胞的研究提供更有效的誘導(dǎo)方案。 方法：以貼壁法分離、培養(yǎng)大鼠BM-MSCs,流式細(xì)胞術(shù)鑒定表面標(biāo)志。實(shí)驗(yàn)分為：對(duì)照組（10%FBS)，0.1μmG-CSF干預(yù)組,20ng/mLHGF干預(yù)組，HGF聯(lián)合G-CSF共同干預(yù)組(0.1μmG-CSF+20ng/mLHGF)，誘導(dǎo)后第7天、14天和21天提取細(xì)胞總RNA以及總蛋白后進(jìn)行RT-PCR和Western blot檢測(cè)白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白水平。 結(jié)果：20ng/mLHGF干預(yù)組和HGF聯(lián)合G-CSF共同干預(yù)組P3代BM-MSCs誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)似肝樣細(xì)胞。BM-MSCs表面標(biāo)志物：CD34-PE0.3%,CD45-FITC0.1%,CD90-FITC99.6%,CD105-PE99.8%。20ng/mLHGF干預(yù)組和HGF聯(lián)合G-CSF共同干預(yù)組檢測(cè)到白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平表達(dá)。在第7天、14天、21天，隨時(shí)間增加ALB表達(dá)量遞增、而AFP表達(dá)量遞減，，且同一時(shí)間兩組表達(dá)量均有差異（P0.05）。 結(jié)論：（1）HGF能誘導(dǎo)大鼠BM-MSCs分化為肝樣細(xì)胞。（2）G-CSF對(duì)HGF誘導(dǎo)大鼠BM-MSCs分化為肝樣細(xì)胞有協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子 粒細(xì)胞集落刺激因子 肝樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R575.3
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一章 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和流式細(xì)胞鑒定13-18
• 1 材料13-14
• 2 方法14-15
• 3 結(jié)果15-16
• 4 討論16-18
• 第二章 大鼠BM-MSCs體外分組及誘導(dǎo)18-20
• 1 材料18
• 2 方法18-19
• 3 結(jié)果19
• 4 討論19-20
• 第三章 大鼠BM-MSCs向肝樣細(xì)胞分化20-32
• 1 材料20-21
• 2 方法21-25
• 3 結(jié)果25-30
• 4 討論30-32
• 全文結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 附圖35-36
• 文獻(xiàn)綜述36-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文46-47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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本文編號(hào)：797079