本文關鍵詞：CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表達質粒的構建和表達

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【摘要】：目的:構建結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表達質粒,并且在大腸桿菌中表達融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作為模板,PCR法擴增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技術中的Gene-SOEing法擴增ESAT6-PPE68融合基因,克隆至原核表達質粒pET-32a(+)中,構建重組表達質粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68。再分別以H37Rv株DNA和重組質粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68為模板擴增CFP10和ESAT6-PPE68基因,Gene-SOEing法獲取目的基因CFP10-ESAT6-PPE68,克隆至pET-32a(+)載體,構建重組表達質粒pET-32a(+)-CFP10-ESAT6-PPE68,轉化入大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導表達。結果:CFP10-ESAT6-PPE68酶切片段大小與理論值符合,基因測序結果顯示融合基因CFP10-ESAT6-PPE68的序列與Genbank中序列一致,并在大腸桿菌中成功誘導表達了目的蛋白,經SDS-PAGE分析和Western blot鑒定,相對分子量約為77 kD。結論:成功構建了M.tb CFP10-ESAT6-PPE68融合基因的原核表達質粒,并誘導表達出了融合蛋白,為該融合蛋白在結核病血清診斷學中的應用奠定了實驗基礎。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學病原生物學教研室、重慶醫(yī)科大學分子醫(yī)學與腫瘤研究中心;
【關鍵詞】： 結核分枝桿菌 培養(yǎng)濾液蛋白 kD早期分泌抗原靶 戊糖--磷酸-差向異構酶 融合蛋白
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:30901280) 重慶市自然科學基金資助項目(編號:cstc2012jjA10023)
【分類號】：R378
【正文快照】： 結核病(tuberculosis,TB)位居單一病原引起病人死亡的嚴重傳染病之首,是世界范圍內第2大傳染病,最新統(tǒng)計結果顯示全世界結核分枝桿菌(my-cobacterium tuberculosis,M.tb)感染者約占人口總數(shù)的1/3[1]。隨著M.tb耐藥菌株的流行與傳播、艾滋病的蔓延、卡介苗(bacillus calmette-g

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本文編號：774256