本文關(guān)鍵詞：重組腺病毒介導(dǎo)恒河猴CD40L胞外段基因在恒河猴未成熟樹突狀細(xì)胞中的表達(dá)和鑒定

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【摘要】：目的：鑒定表達(dá)恒河猴CD40L胞外段基因的重組腺病毒載體在恒河猴未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cell, imDC)中的穩(wěn)定表達(dá)。 方法： 1)應(yīng)用HEK293細(xì)胞包裝腺病毒載體pAd-CMV-sCD40L,并用deno-X純化試劑盒純化病毒； 2)使用淋巴細(xì)胞分離液分離恒河猴單個(gè)核細(xì)胞； 3)磁珠法分選恒河猴骨髓血中CD34+陽性細(xì)胞,應(yīng)用IL-4及GM-CSF誘導(dǎo)分化為imDC,并通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定純度及成熟度； 4)重組腺病毒載體感染恒河猴imDC; 5) PCR以及Western Blot鑒定CD40L在imDC中的表達(dá)。 6)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),使用CCK-8試劑盒檢測不同處理組的樹突狀細(xì)胞對刺激T細(xì)胞增殖的能力。 結(jié)果：PT-PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳,可見一大小約為170bp條帶,與目的基因擴(kuò)增出的理論條帶大小一致；western blot可見23KD處出現(xiàn)特異性條帶,與目的蛋白大小一致；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中(相同的反應(yīng)比例),重組腺病毒感染未成熟樹突狀細(xì)胞處理組對刺激T細(xì)胞增殖的能力顯著低于其他處理組。 結(jié)論：恒河猴CD40L胞外段基因可以在恒河猴imDC中穩(wěn)定的表達(dá),且具有阻斷CD40-CD40L通路,從而抑制T細(xì)胞增殖。 展望：重組腺病毒感染的未成熟樹突狀細(xì)胞在恒河猴肝移植中將被注射入受體恒河猴門靜脈中,預(yù)計(jì)可有效誘導(dǎo)恒河猴肝移植免疫耐受。
【關(guān)鍵詞】：恒河猴 未成熟樹突狀細(xì)胞 重組腺病毒載體 免疫耐受
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R657.3
【目錄】：

• 中英文~.寫詞表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 引言9-11
• 主要實(shí)驗(yàn)材料11-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 討論38-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述44-56
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 論文發(fā)表情況56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：752308