本文關(guān)鍵詞：攜帶標(biāo)記基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討含有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白標(biāo)記基因的慢病毒(Lentivirus-EGFP)體外轉(zhuǎn)染人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞(HUWMSCs)的最佳方案及其對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。方法設(shè)計(jì)A、B、C、D共4種轉(zhuǎn)染方案,分別以1、10、100的感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的HUWMSCs,熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組熒光表達(dá)強(qiáng)度及轉(zhuǎn)染效率,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖倍數(shù)。結(jié)果轉(zhuǎn)染4 d后所有實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染率在10.6%~87.3%,并與MOI值存在量效關(guān)系,聚凝胺(5 mg/L)可顯著增加病毒轉(zhuǎn)染效率(P0.05)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,不同轉(zhuǎn)染方案細(xì)胞增殖存在顯著差異(P0.001)。A方案MOI=10組及B方案MOI=10組細(xì)胞增殖情況較其他組好。結(jié)論B方案MOI=10實(shí)驗(yàn)組為最佳轉(zhuǎn)染方案。Lentivirus-EGFP能高效轉(zhuǎn)染HUWMSCs且在2周內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染基因,是一種安全、有效的基因轉(zhuǎn)移載體。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)海軍臨床醫(yī)學(xué)院;中國人民解放軍海軍總醫(yī)院心臟中心;
【關(guān)鍵詞】： 間質(zhì)干細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù) 慢病毒屬 遺傳載體 基因療法 轉(zhuǎn)染 細(xì)胞增殖
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):81170094)
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 干細(xì)胞工程研究通常需要在體外對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行基因修飾與改造,目前用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因修飾的工具主要包括質(zhì)粒載體、腺病毒載體、反轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒(Lentivirus)載體等。其中,慢病毒載體是以人類免疫缺陷型病毒(HIV)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因修飾載體,它對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉明濤;蔡力;陶劍虹;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞定向分化及其臨床移植研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2012年02期

2 劉曉艷;方紅;朱定仙;張妤;;基于miR30骨架的HPSE-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其效應(yīng)研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

3 姚永釗;馬翔;;基因修飾干細(xì)胞治療缺血性心臟病的現(xiàn)狀與前景[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年40期

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 崔璨;CGRP及其受體亞單位RAMP1對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控作用[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 何紅燕;林曉波;應(yīng)文娟;林麗敏;馮學(xué)永;王鴻武;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)體內(nèi)定植并向心肌樣細(xì)胞分化的研究[J];中國輸血雜志;2009年03期

2 林曉波;何紅燕;羅敏潔;崔冰琳;馮學(xué)永;蔣學(xué)武;謝慶東;黃天華;應(yīng)文娟;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2007年13期

3 王愛紅;何紅燕;羅敏潔;黃天華;馬廉;馬桂霞;林麗敏;林廣裕;史雪川;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞的分化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年21期

4 于洪宇;馬春宇;鄭曉明;;體外誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島β樣細(xì)胞的分化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年19期

5 趙振強(qiáng);陳志斌;蔡美華;王淑榮;陳蓉;王W，

本文編號(hào)：748574