本文關(guān)鍵詞：采用弓形蟲(chóng)T7噬菌體文庫(kù)篩選黏附相關(guān)蛋白基因的研究

  更多相關(guān)文章： 弓形蟲(chóng) 貓腸上皮細(xì)胞 噬菌體 黏附蛋白 棒狀體蛋白

【摘要】：目的用原代培養(yǎng)的貓腸上皮細(xì)胞(IECs)對(duì)已構(gòu)建的弓形蟲(chóng)T7噬菌體展示文庫(kù)進(jìn)行篩選,期望得到將新的弓形蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞黏附相關(guān)蛋白基因。方法將貓IECs與混有噬菌體文庫(kù)的DMEM培養(yǎng)基孵育培養(yǎng)后進(jìn)行洗脫篩選,再與宿主菌BLT5403共同培養(yǎng)擴(kuò)增文庫(kù),篩選噬菌體DNA并進(jìn)行基因序列測(cè)定與分析。結(jié)果洗脫下的噬菌體滴度從第1輪7.6×105到第5輪的3.6×107,富集了230倍,非特異性結(jié)合和親和力低的噬菌體被成功去除;核苷酸序列分析表明含插入片段為394bp的噬菌體富集量最大,經(jīng)檢索為弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白基因,是棒狀體蛋白基因ROP2和ROP8的共有序列。結(jié)論初步證明弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白為黏附相關(guān)蛋白基因,其表達(dá)產(chǎn)物為ROP2。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院山東省寄生蟲(chóng)病防治研究所;濟(jì)南大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲(chóng) 貓腸上皮細(xì)胞 噬菌體 黏附蛋白 棒狀體蛋白
【基金】：山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.ZR2010HQ062)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)屬于專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),呈世界性分布,能夠感染幾乎所有溫血?jiǎng)游锛叭祟?lèi)。弓形蟲(chóng)生活史復(fù)雜,宿主感染譜廣泛,貓及其他貓科動(dòng)物是弓形蟲(chóng)生活史中的唯一終末宿主[1]。有性生殖也只限于在貓科動(dòng)物腸道上皮細(xì)胞(IECs)內(nèi)進(jìn)行。貓感染弓形蟲(chóng)后可排出大

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本文編號(hào)：729951