本文關(guān)鍵詞：H7N9亞型禽流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白-1真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)

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【摘要】：目的:構(gòu)建甲型H7N9亞型禽流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞以表達(dá)其編碼的蛋白。方法:從南京分離株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增NS1全長(zhǎng)基因,將其克隆至pMD18-T載體中構(gòu)建pMD18-T-NS1質(zhì)粒,以pMD18-T-NS1質(zhì)粒為模板擴(kuò)增NS1基因。雙酶切NS1基因PCR產(chǎn)物與PXJ40-MYC后,連接構(gòu)建真核表達(dá)載體PXJ40-MYC-NS1,經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定后將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中,通過Western blot鑒定NS1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:經(jīng)雙酶切、測(cè)序鑒定證實(shí)NS1基因的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。Western blot法可見NS1基因編碼蛋白的成功表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了H7N9非結(jié)構(gòu)蛋白NS1真核表達(dá)載體,該表達(dá)載體的構(gòu)建為后期建立穩(wěn)定表達(dá)NS1蛋白的細(xì)胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江蘇省疾病預(yù)防控制中心病原微生物研究所 衛(wèi)生部腸道病原微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： HN亞型禽流感病毒 NS 真核表達(dá) 免疫印跡
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(2012ZX10004-210-004)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 禽流感(avian influenza,AI)是由禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的一種禽類感染和(或)疾病綜合征。根據(jù)AIV致病力的差異,將其分為高致病性禽流感(highly pathogenic avian influen-za,HPAIV,如H5N1)和低致病性禽流感(lowpathogenic avian influenza,LPAIV,如H9N2)

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張長(zhǎng)輝;亓文寶;田進(jìn);李華楠;黃麗紅;焦培榮;徐成剛;廖明;;一株H4N6亞型禽流感病毒A/duck/Guangdong/W8/2011(H4N6)的全基因組測(cè)序及遺傳進(jìn)化分析[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2013年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 程凱慧;H6N1亞型禽流感對(duì)哺乳動(dòng)物的傳播與致病機(jī)制研究[D];石河子大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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2 郭捷;H1亞型禽流感病毒分離鑒定、遺傳進(jìn)化分析及快速檢測(cè)方法的研究[D];廣西大學(xué);2013年

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 沈嵐,李霞,張自峰,蘇金,劉新平,藥立波;人akt1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年07期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 藺麗慧;崔玉寶;李莉;;Fcγ-Der f2載體構(gòu)建及融合蛋白表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

3 魏中南;夏劍波;;乙型肝炎病毒前S2基因克隆及真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 胡珍;饒賢才;陳志瑾;朱軍民;劉佳;王嘉麗;張俊磊;王冬梅;楊杰;原薇薇;;雙價(jià)D-J假病毒真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];重慶微生物學(xué)會(huì)第九屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2009年

5 康艷梅;趙明秋;沈海燕;琚春梅;陳金頂;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5/6/7基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

6 李少麗;王昌慶;丁壯;叢彥龍;尹仁福;;NA-1株鵝源新城疫病毒全長(zhǎng)cDNA的獲得[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 王龍;胡s，

本文編號(hào)：714829