本文關(guān)鍵詞：重組小鼠IFN-β原核表達載體的構(gòu)建及包涵體溶解條件的篩選

  更多相關(guān)文章： 干擾素β 原核表達 包涵體

【摘要】：目的:通過重組小鼠干擾素β(IFN-β)原核表達載體的構(gòu)建及對包涵體溶解條件的篩選,建立IFN-β原核表達模型,為篩選適合的包涵體溶解條件提供實驗依據(jù)。方法:小鼠新鮮肝組織中提取DNA,傳統(tǒng)方法構(gòu)建小鼠IFN-β原核表達載體并命名為IFN-β′。SDS-PAGE檢測以傳統(tǒng)方法、pH環(huán)境、溶解液成分、干菌與溶解液比例、溶解溫度和溶解時間的改變對包涵體溶解效果的影響。結(jié)果:IFN-β′成熟蛋白鑒定結(jié)果與預測結(jié)果吻合,誘導表達正常。改變pH值、在溶解液中加入DTT對包涵體溶解效果無影響,包涵體經(jīng)洗滌液洗滌后亦不能被溶解液所溶解,溫度對包涵體溶解幾乎無影響,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加為1g菌∶20mL溶解液時能溶解部分IFN-β′蛋白包涵體。結(jié)論:成功構(gòu)建重組小鼠IFN-β原核表達載體,其蛋白以包涵體形式存在,且不易被溶解,在篩選的包涵體溶解條件中僅溶解液比例為影響包涵體蛋白溶解條件。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學生命科學學院;吉林大學白求恩醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室;
【關(guān)鍵詞】： 干擾素β 原核表達 包涵體
【基金】：國家自然科學基金資助課題(81060098) 吉林省科技廳科研基金資助課題(20060416)
【分類號】：R363
【正文快照】： 干擾素β(interferon-β,IFN-β)具有廣泛的抗病毒作用,對一般病毒感染有促進機體恢復及縮短病程的作用[1-2]。IFN-β對某些癌細胞有抑制作用,可下調(diào)細胞原癌基因的轉(zhuǎn)錄水平,下調(diào)某些生長因子受體表達[3],對巨噬細胞的功能有增進作用,并可調(diào)節(jié)T、B淋巴細胞的功能[4]。利用基

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 程太平;榮俊;劉曉娜;鄒浩勇;齊曉亮;樊友凈;;IBDV VP2基因重組質(zhì)粒pBV220表達條件的優(yōu)化[J];動物醫(yī)學進展;2007年04期

2 朱紅裕;李強;;外源蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達策略[J];過程工程學報;2006年01期

3 龍英娜;劉煥奇;王明志;;重組包涵體的純化與復性[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年04期

4 羅莉;何勇智;張勇俠;王明蓉;;功能性包涵體的研究進展[J];中國生物工程雜志;2013年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏磊;杜永才;王玉民;;皖北黃牛MHC基因遺傳多樣性及分子系統(tǒng)關(guān)系[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年14期

2 楊連君,隋延仿,陳志南;干擾素對肝癌細胞HLA-DR表達的增強作用[J];癌癥;1999年02期

3 蕭劍軍,何潔冰,何庭宇,彭杰文,雷風;化療對晚期肺癌患者T淋巴細胞亞群和紅細胞免疫功能的影響[J];癌癥;2001年12期

4 王毅鑫,蘇文利,朱文獻;T細胞表面細胞表型的變化與胃癌分期及術(shù)式的關(guān)系[J];癌癥;2004年09期

5 徐紅;毛一香;張學光;王慶才;;晚期消化道腫瘤患者化療前后T細胞亞群的變化[J];癌癥;2008年04期

6 鎖孝坤,梁俊;白細胞介素的生物學活性及其應用[J];安徽教育學院學報(自然科學版);1999年02期

7 錢宛馨,呂美榮,柏平,王鳳超;腫瘤患者腫瘤壞死因子檢測及其臨床意義[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2002年01期

8 梁寧;;尖銳濕疣患者治療前后血清IL-2、IL-6和TNF-α水平檢測的臨床意義[J];標記免疫分析與臨床;2006年03期

9 柏峻，王利，臧星星，，馬寶驪;胃癌和肺癌病人PBMC產(chǎn)生抗腫瘤細胞因子能力變化的研究[J];標記免疫分析與臨床;1996年02期

10 馬曉云;現(xiàn)代生物技術(shù)對反興奮劑的作用及展望[J];北京體育大學學報;2005年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳淑瓊;謝春紅;歐陽紫婷;沈艷;羅嵐;;胎樂顆粒對先兆流產(chǎn)患者血清TNF-a和P的影響[A];第十一次全國中醫(yī)婦科學術(shù)大會論文集[C];2011年

2 崔凱;顏培宇;張德山;宮凌濤;張希良;;膈下逐瘀湯對小鼠IL-2和sIL-2R影響的實驗研究[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

3 陳繼婷;楊毅;;加味枳術(shù)湯對脾氣虛證大鼠IL-1和D-木糖影響的實驗研究[A];仲景醫(yī)學求真（續(xù)二）——中華中醫(yī)藥學會第十六屆仲景學說學術(shù)研討會論文集[C];2008年

4 王彥妮;曾顯營;田國彬;蘇文;陳化蘭;;AA肉雞免疫禽流感油乳劑滅活疫苗細胞免疫應答的變化[A];第二屆中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2010年

5 李婷;張英杰;劉月琴;;羊MHC基因的研究現(xiàn)狀[A];中國畜牧獸醫(yī)學會養(yǎng)羊?qū)W分會2012年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學術(shù)研討會議論文集[C];2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 成述儒;藏綿羊DQA1、DQA2和DRB3基因多態(tài)性與單倍型連鎖分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 許明;籽粒莧AmA1基因和人乳鐵蛋白基因轉(zhuǎn)化水稻的研究[D];福建農(nóng)林大學;2011年

3 蔣雪峰;人腦膠質(zhì)瘤CD105表達和膠質(zhì)瘤干細胞在血管生成中的作用及機制初探[D];第三軍醫(yī)大學;2011年

4 鄭燕芳;抗人乳頭瘤病毒16型E6基因核酶對宮頸癌細胞株表型和基因調(diào)控的影響[D];第一軍醫(yī)大學;2000年

5 王磊;免疫進化計算理論及應用[D];西安電子科技大學;2001年

6 王純潔;實驗性禽腦脊髓炎分子發(fā)病學及分子免疫機理的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2002年

7 顧菊林;隱球菌性腦膜炎的臨床和實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2002年

8 韓濤;重肌靈抗重癥肌無力的主要藥理作用及作用機制的研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2003年

9 郝晉東;十二井穴針法治療局灶性腦缺血機理的時效相關(guān)性研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2003年

10 楊偉鵬;清熱涼血法（犀角地黃湯加味）治療過敏性紫癜的配伍研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2003年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白家媛;櫻桃谷鴨CD8α胞外區(qū)多肽的原核表達、抗體制備及初步應用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 亓振國;分子伴侶表達載體構(gòu)建及TEV蛋白酶突變體的功能分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學;2010年

3 葉平;雞MHCⅡ類分子基因片段原核表達及其單抗的制備與鑒定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學;2010年

4 李少斌;放牧型羔羊肉生產(chǎn)優(yōu)化雜交組合篩選和藏綿羊DRB1基因第2外顯子多態(tài)性分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

5 宋東鎣;木聚糖酶基因工程菌G81的構(gòu)建及酶學性質(zhì)研究[D];河南師范大學;2010年

6 陳小平;主動免疫重組綿羊β_2-腎上腺素受體對大鼠生長及血清生化指標的影響[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2010年

7 郭燕紅;BL0033與BL0034在長雙歧桿菌果糖ABC轉(zhuǎn)運系統(tǒng)中功能的研究[D];江南大學;2010年

8 李闖;重組膽固醇氧化酶表達的發(fā)酵優(yōu)化[D];江南大學;2010年

9 潘翔;v-Src的基因重組、表達及活性分析[D];浙江大學;2011年

10 漆奮強;食管癌不同手術(shù)方式對患者術(shù)后體液免疫功能的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張智清,姚立紅,侯云德;含P_RP_L啟動子的原核高效表達載體的組建及其應用[J];病毒學報;1990年02期

2 竇鴻,李民,毛積芳,陳常慶;高密度培養(yǎng)大腸桿菌TG1/pGEX-hCT和高表達重組人降鈣素[J];第二軍醫(yī)大學學報;2000年03期

3 王海波,歐俊杰,耿信篤;重組大腸桿菌生產(chǎn)rhG-CSF發(fā)酵工藝的研究[J];寧夏大學學報(自然科學版);2004年02期

4 段淑敏,李福勝,楊新科,陳文濤;大腸桿菌表達的rhGM—CSF發(fā)酵純化工藝研究[J];中國生物制品學雜志;1996年03期

5 鄒平;;重組包涵體蛋白質(zhì)復性[J];廈門科技;2005年05期

6 張佳藝,關(guān)怡新,姚善涇;小分子伴侶GroEL(191-345)在E.coli中的表達及其培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J];浙江大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版);2003年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉正芳;王建明;王嵐;曾曉云;熊玲;羅志秀;伍俊伊;;重組大鼠肝再生增強因子原核表達載體構(gòu)建及多克隆抗體制備[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年11期

2 趙振國;江渝;彭家和;;人可溶性CD40L cDNA的克隆及表達[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年07期

3 吳永革;尹艷春;孫天旭;于湘暉;姜春來;金英花;孔維;;阿爾采默病治療性疫苗原核表達載體的構(gòu)建[J];中國生物制品學雜志;2007年04期

4 何方平;王星;林仁勇;盧曉梅;馮曉輝;張亞樓;張躍新;何斌;溫浩;;人類8型皰疹病毒K8.1基因原核表達重組質(zhì)粒的構(gòu)建[J];新疆醫(yī)科大學學報;2007年02期

5 王鵬;王華茂;周敏;劉素霞;林志新;徐宇虹;李宗海;;腺病毒5型knob蛋白的原核表達、純化及其單克隆抗體的制備[J];細胞與分子免疫學雜志;2007年11期

6 馮智慧;焦淑賢;李長纓;胡彬;劉曉華;;人GST-PTEN融合蛋白的原核表達和純化[J];醫(yī)學分子生物學雜志;2008年04期

7 李姣;郭建英;王愛萍;鄧瑞廣;張淑杰;游雷鳴;;一種豬-鼠B細胞雜交瘤的制備方法[J];第四軍醫(yī)大學學報;2009年03期

8 陳銳;劉友生;朱江;段光杰;易維京;胡川閩;;人源N-末端脂多糖結(jié)合蛋白(NH-LBP)的原核表達及抗原性分析[J];免疫學雜志;2009年03期

9 曹春雨;韓鈺;任玉珊;王艷林;;人精胺氧化酶的原核表達及多克隆抗體制備[J];細胞與分子免疫學雜志;2009年10期

10 吳s

本文編號：702372