本文關(guān)鍵詞：博卡病毒MVC結(jié)構(gòu)蛋白VP2多克隆抗體的制備與鑒定

  更多相關(guān)文章： 犬博卡病毒 VP2蛋白 原核表達(dá) 多克隆抗體

【摘要】：目的犬博卡病毒MVC(Minute Virus of canine)是細(xì)小病毒家族博卡病毒亞家族的成員之一。而VP2作為MVC病毒的結(jié)構(gòu)蛋白,不僅是構(gòu)成衣殼蛋白的主要成分,更是細(xì)小病毒的主要免疫原性抗原,其具有凝血活性的物質(zhì),是作為決定宿主范圍以及宿主與病毒之間相互作用的關(guān)鍵影響因素。因此,本文通過(guò)構(gòu)建MVC的VP2結(jié)構(gòu)蛋白的原核表達(dá)載體,通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)、純化目的蛋白,免疫兔子、制備針對(duì)VP2的多克隆抗體,為進(jìn)一步研究VP2在MVC病毒致病及感染中的作用,深入揭示MVC病毒致病及感染的分子機(jī)制奠定研究基礎(chǔ)。方法(1)以本實(shí)驗(yàn)室保存的博卡病毒MVC的感染性克隆載體p IMVC為模板PCR擴(kuò)增VP2基因,并將其產(chǎn)物純化。將純化產(chǎn)物與表達(dá)載體p ET32a(+)經(jīng)EcorⅠ、XhoⅠ同時(shí)雙酶切,經(jīng)T4連接酶連接,轉(zhuǎn)化到克隆菌株Ecoli.DH5α以及表達(dá)菌株Ecoli.BL21,通過(guò)雙酶切鑒定正確后,進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE檢測(cè)和鑒定目的蛋白的表達(dá)。目標(biāo)蛋白經(jīng)大量表達(dá)后,回收細(xì)菌超聲裂解并Ni柱純化,以純化產(chǎn)物作為完全抗原免疫新西蘭大白兔。(2)ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)。(3)以MVC感染W(wǎng)RD(Walter Reed Dog)嗜性細(xì)胞,然后運(yùn)用Western blot和免疫熒光技術(shù)鑒定抗體特異性。結(jié)果(1)DNA序列測(cè)定及雙酶切鑒定結(jié)果均顯示MVC-VP2基因成功構(gòu)建至原核表達(dá)載體p ET32a(+)上,原核表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定后證實(shí)成功表達(dá)一相對(duì)分子量(Mr)約為39kd的目的蛋白條帶,VP2目的蛋白主要以可溶性蛋白形式存在。(2)以純化得到的MVC-VP2重組蛋白免疫制備得到兔血清,ELISA方法測(cè)得其效價(jià)為1:200 000。(3)Western blot、免疫熒光方法證實(shí)VP2多抗血清能夠成功檢測(cè)MVC感染的WRD細(xì)胞,并且具有特性。結(jié)論成功構(gòu)建了MVC結(jié)構(gòu)蛋白基因VP2的原核表達(dá)載體p ET32a(+)-VP2,并表達(dá)了相應(yīng)的可溶性蛋白。制備了高效價(jià)博卡病毒MVC的VP2多克隆抗體,具有很好的特異性。
【關(guān)鍵詞】：犬博卡病毒 VP2蛋白 原核表達(dá) 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文縮略詞表8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-28
• 結(jié)果28-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-51
• 綜述參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 已發(fā)表文章52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53

【相似文獻(xiàn)】

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1 羅迪賢;劉巧突;林應(yīng)標(biāo);戴國(guó)知;夏承來(lái);何志雄;張治明;許燦新;廖端芳;;人類博卡病毒基因組序列與進(jìn)化分析[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2006年06期

2 林峰;;人博卡病毒感染的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2007年02期

3 傅希;伍嚴(yán)安;;博卡病毒的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年15期

4 嚴(yán)華杰;盛軍;董蔚;管麗華;王蔚;王凱;任培君;邵潔;;上海嘉定地區(qū)連續(xù)3年兒童人博卡病毒感染的研究[J];臨床兒科雜志;2010年06期

5 陳倩;胡正;;人博卡病毒的研究進(jìn)展[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2010年08期

6 李建寧;姚青;孫玉寧;;博卡病毒屬基因組特征與致病的分子機(jī)制[J];微生物學(xué)報(bào);2013年05期

7 何濤君;王瓊;何英;黃烈;張銀輝;林廣裕;陸學(xué)東;;采用半巢式PCR技術(shù)從臨床標(biāo)本中克隆人類博卡病毒的全基因[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年01期

8 林峰;曾愛(ài)平;楊寧敏;林海燕;鄭昌華;李樺;陳弘;李旭陽(yáng);郁明素;楊寶順;金大智;;小兒人博卡病毒感染臨床與實(shí)驗(yàn)研究[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2006年09期

9 黃頭華;;我國(guó)醫(yī)學(xué)界首次發(fā)現(xiàn)人類博卡病毒[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2006年09期

10 鄭敏巧;林峰;鄭美云;陳弘;曾愛(ài)平;吳峰;;人博卡病毒母嬰感染的臨床前瞻性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2007年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曹虹;彭亮;;新型微小病毒——人類博卡病毒[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 林峰;曾愛(ài)平;楊寧敏;林海燕;鄭昌華;李樺;陳弘;李旭陽(yáng);郁明素;金大智;王升啟;;小兒博卡病毒感染的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省兒科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

3 林峰;曾愛(ài)平;林海燕;鄭昌華;李樺;陳弘;李旭陽(yáng);郁明素;楊寧敏;金大智;王升啟;;小兒博卡病毒感染的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

4 陸學(xué)東;林廣裕;周仁彬;王瓊;林創(chuàng)興;楊來(lái)智;陸長(zhǎng)東;;廣東地區(qū)首例人博卡病毒的檢出及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

5 王婷;李昌崇;陳小芳;聶穎;崇蕾;;溫州地區(qū)人博卡病毒在急性喘息患兒中的檢測(cè)及其病毒載量與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)分析[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

6 林峰;;人博卡病毒感染支氣管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征研究[A];2008年浙江省兒科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 王婷;李昌崇;陳小芳;聶穎;崇蕾;;溫州地區(qū)人博卡病毒在急性喘息患兒中的檢出及其病毒載量與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)兒科呼吸學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

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9 何彪;楊凡力;涂長(zhǎng)春;;中國(guó)蝙蝠病毒宏基因組學(xué)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

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中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者　 鄧明 通訊員　 白培生 劉巧突;郴州在國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)人類博卡病毒[N];湖南日?qǐng)?bào);2006年

2 記者 吳德群;口岸連查4宗 人感染博卡病毒[N];深圳特區(qū)報(bào);2012年

3 陳茂j 趙斌;溫嶺市一院在我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人博卡病毒[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

4 記者 王理略 通訊員 任麗瓊;首次克隆出人博卡病毒全基因組[N];湖北日?qǐng)?bào);2014年

5 貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 郝飛 湯德元;豬博卡病毒研究進(jìn)展[N];河北科技報(bào);2012年

6 記者　 龍軍;我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人類博卡病毒HBoV[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

7 洪衛(wèi) 張敏;迎接照耀醫(yī)學(xué)高峰的新曙光[N];浙江日?qǐng)?bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 李雪萌;博卡病毒感染的檢測(cè)和原始抗原效應(yīng)的相關(guān)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 張若曦;豬博卡病毒NP1蛋白調(diào)控Ⅰ型干擾素反應(yīng)分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 程衛(wèi)霞;博卡病毒流行病學(xué)、致病性及基因進(jìn)化研究[D];蘭州大學(xué);2011年

4 趙慧;兒童腹瀉相關(guān)的人博卡病毒2型的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 鄧雪鋒;人類博卡病毒感染性克隆的構(gòu)建及體外感染模型的研究[D];華中師范大學(xué);2013年

6 李京京;人類博卡病毒HBoV1基因組克隆及轉(zhuǎn)錄、翻譯分子機(jī)制研究[D];華中師范大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃寶慧;豬博卡病毒NP08株的基因組序列分析及其對(duì)豬腸上皮細(xì)胞的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 鄭英帥;豬博卡病毒間接ELISA診斷方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 劉萌萌;屠宰豬博卡病毒全基因序列測(cè)定及檢測(cè)技術(shù)研究[D];天津大學(xué);2014年

4 李亞敏;重癥急性呼吸道感染兒童中人博卡病毒和人腺病毒的分型檢測(cè)與分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

5 崔換弟;人博卡病毒1-4型重組分析及人博卡病毒1型相關(guān)質(zhì)粒的構(gòu)建[D];蘭州大學(xué);2014年

6 姚爽;2014-2015年黑龍江三個(gè)地區(qū)犬博卡病毒的PCR檢測(cè)及遺傳變異分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

7 馬俊;重組桿狀病毒介導(dǎo)的豬博卡病毒VP2蛋白的表達(dá)及其免疫原性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 馬婧;博卡病毒MVC結(jié)構(gòu)蛋白VP2多克隆抗體的制備與鑒定[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

9 馬均;兒童急性呼吸道感染人博卡病毒檢測(cè)及分析[D];吉林大學(xué);2009年

10 梁丹丹;小兒呼吸道人類博卡病毒感染免疫致病機(jī)制的初步研究[D];汕頭大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：699457