本文關(guān)鍵詞：基于流式細(xì)胞術(shù)的scFv抗體庫篩選技術(shù)的建立

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【摘要】：目的利用NlpA前導(dǎo)肽誘導(dǎo)抗體錨定細(xì)菌內(nèi)膜建立篩選scFv抗體庫的展示技術(shù),為高親和力抗體的篩選奠定基礎(chǔ)。方法從pNAD質(zhì)粒中克隆出NlpA前導(dǎo)肽基因序列,酶切后將該序列克隆進(jìn)pHEN1表達(dá)載體中。以PEAI質(zhì)粒為模板,利用PCR的方法克隆得到抗-hIL-1β抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因,然后利用重疊PCR的方法構(gòu)建得到抗-hIL-1βscFv抗體。將scFv抗體插入到NlpA leader-pHEN1表達(dá)載體中構(gòu)建成展示scFv的重組質(zhì)粒pBSD-scFv。將pBSD-scFv轉(zhuǎn)入到E.coli DH5α中誘導(dǎo)表達(dá),原生質(zhì)球制備后,采用梯度濃度的抗原進(jìn)行孵育,最后經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測抗體展示情況并且分選陽性群體,利用質(zhì)粒提取的方法來替代PCR方法拯救陽性基因,轉(zhuǎn)化E.coli DH5α,利用FCM再次檢測該群體展示的抗體與抗原結(jié)合情況。結(jié)果所展示的抗-hIL-1βscFv抗體依次與抗原和FITC標(biāo)記的抗原特異性抗體孵育后,用FCM實(shí)時(shí)檢測,結(jié)果顯示出很強(qiáng)的熒光信號并且表現(xiàn)出抗原濃度依賴性。拯救出的pBSD-scFv-原生質(zhì)球的FCM檢測結(jié)果與首次展示的FCM結(jié)果一致,該系統(tǒng)能夠穩(wěn)定的展示抗體。結(jié)論經(jīng)過該細(xì)菌展示系統(tǒng)展示的scFv抗體能夠有效的折疊,與相應(yīng)的抗原具有很好的特異結(jié)合能力。
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物制藥教研室;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)菌展示 流式細(xì)胞儀篩選 scFv抗體庫
【基金】：哈爾濱市科技創(chuàng)新人才研究專項(xiàng)資金(2008RFQXS017) 國家自然科學(xué)基金(201031001084;30700591)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 基因工程抗體由于其高專一性、高親和力、高效性和高可塑性被廣泛應(yīng)用于疾病的臨床診斷、預(yù)防、治療及基礎(chǔ)理論研究等領(lǐng)域[1]。目前篩選抗體的方法有噬菌體展示技術(shù)、酵母展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、細(xì)菌展示技術(shù)等。與細(xì)菌展示技術(shù)相比,噬菌體展示技術(shù)耗時(shí)費(fèi)力,酵母展示技術(shù)

【參考文獻(xiàn)】

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3 徐黎明;尹成凱;任桂萍;田輝;王雪琴;丁良君;李德山;;篩選Fab抗體庫的細(xì)菌展示技術(shù)的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年10期

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【共引文獻(xiàn)】

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2 徐黎明;尹成凱;任桂萍;田輝;王雪琴;丁良君;李德山;;篩選Fab抗體庫的細(xì)菌展示技術(shù)的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年10期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 封小燕;王艷春;李平超;陶好霞;王們;袁盛凌;王令春;王普;劉純杰;;幽門螺桿菌Ure B串聯(lián)融合表位的表面呈現(xiàn)表達(dá)[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

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2 岳禮溪;解脂耶羅威亞酵母菌表面展示質(zhì)粒的構(gòu)建及應(yīng)用的初步研究[D];中國海洋大學(xué);2009年

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【二級參考文獻(xiàn)】

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1 杜勇,周建軍,王海濤;應(yīng)用細(xì)菌鞭毛遞呈的隨機(jī)肽庫研究丙型肝炎病毒核心蛋白B細(xì)胞抗原表位[J];病毒學(xué)報(bào);1998年04期

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4 琦祖和,閻s，

本文編號：694586