本文關鍵詞：A20人工鋅指轉錄因子真核載體的構建及其對內皮細胞炎癥反應的影響

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【摘要】：目的觀察A20基因的人工鋅指轉錄因子(zinc finger-artificial transcription factor,ZF-ATF)對內源性A20基因及內皮細胞炎癥反應的影響。方法根據(jù)人A20基因的序列,設計出其ZF-ATF,合成靶序列Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與通過BamHⅠ和KpnⅠ酶切后的載體連接產生ZF-ATF真核載體,質粒轉化感受態(tài)細菌DH5α,篩選陽性克隆,提取質粒,限制性內切酶酶切鑒定,鑒定陽性克隆進行測序。質粒DNA轉染人臍靜脈內皮細胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),通過Western blot檢測A20蛋白的表達,用脂多糖(LPS)誘導HUVEC細胞產生炎癥反應,利用Western blot檢測NF-κB p65的表達情況,利用ELISA檢測TNF-α、IL-6、IL-8等的水平。結果限制性內切酶酶切鑒定與DNA測序證實合成的含ATF的真核載體寡核苷酸鏈插入正確,Western blot證實轉染HUVEC后A20蛋白表達顯著增加。ELISA法檢測結果表明,在LPS刺激后,空載體組及空白組細胞因子IL-8、IL-6、TNF-α表達均明顯上調,而ZF-ATF轉染組沒有明顯上調,與空載體組及空白組比較,有統(tǒng)計學差異(P0.05,P0.01);Western blot證實在LPS刺激后ZF-ATF轉染組NF-κB p65的表達(19.8±4.5)較空載體組(90.2±5.9)及空白組(96.3±3.3)顯著下調(P0.01)。結論成功構建人工鋅指轉錄因子真核表達載體,且能夠啟動內源性A20的穩(wěn)定表達,并發(fā)揮其抗炎等作用。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院神經(jīng)內科;
【關鍵詞】： A 人工轉錄因子 抗炎作用
【基金】：國家自然科學基金(81000671) 重慶市自然科學基金(CSTC2010BB5190)~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 缺血性腦血管病是常見病、多發(fā)病,致殘率與病死率均高。微創(chuàng)的血管內介入治療應用于缺血性腦血管病的二級預防,顯著降低了卒中的發(fā)生率。但是球囊擴張、支架植入等經(jīng)皮血管成形術(percutaneous trans-luminal angioplasty,PTA)對局部血管造成的損傷以及過度修復反應———再

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本文編號：672568