本文關(guān)鍵詞：人巨細(xì)胞病毒UL141編碼蛋白相互作用蛋白的篩選和分析

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【摘要】：目的應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選人胎腦cDNA文庫(kù)中與人巨細(xì)胞病毒(HCMV)UL141編碼蛋白相互作用的蛋白,以進(jìn)一步研究HCMV UL141的生物學(xué)功能,為揭示HCMV先天感染機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HCMV-UL141基因片段,將其插入到pGBKT7載體中,構(gòu)建成誘餌質(zhì)粒pGBKT7-UL141。然后將pGBKT7 UL141轉(zhuǎn)化到酵母感受態(tài)細(xì)胞AH109中,于一缺培養(yǎng)基(SD/Trp)上篩選生長(zhǎng)。再將人胎腦cDNA文庫(kù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到含有pGBKT7-UL141質(zhì)粒的AH109菌株中,在四缺培養(yǎng)基(SD/Trp/Leu/His/Ade)中篩選相互作用的人胎腦cDNA文庫(kù)蛋白。通過(guò)顯色反應(yīng)挑選顯藍(lán)色的陽(yáng)性克隆,提取相應(yīng)質(zhì)粒將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中,并進(jìn)行回轉(zhuǎn)驗(yàn)證。最后對(duì)篩選得到的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序及生物信息學(xué)分析。結(jié)果誘餌質(zhì)粒pGBKT7UL141構(gòu)建成功。篩選獲得6個(gè)克隆與HCMV-UL141編碼蛋白相互作用,其中1個(gè)基因編碼人類(lèi)染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)。結(jié)論成功應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出與HCMV-UL141編碼蛋白相互作用的人體組織蛋白——CHD3,提示UL141蛋白可能與病毒的免疫逃避,干擾正常細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化相關(guān)。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病毒研究室;
【關(guān)鍵詞】： 人巨細(xì)胞病毒 UL蛋白 酵母雙雜交系統(tǒng) 人胎腦cDNA文庫(kù)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81171581)
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【正文快照】： 人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一種普遍存在的皰疹病毒,在人群中感染率為50%~80%[1]。正常人感染HCMV后表現(xiàn)為無(wú)癥狀的隱性或潛伏感染。而一旦人體的免疫機(jī)能發(fā)生重大變化時(shí)(如妊娠、腫瘤、HIV感染、器官移植和新生兒等),HCMV即從潛伏感染活化成為原發(fā)性或 繼

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【相似文獻(xiàn)】

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2 王，

本文編號(hào)：645747