本文關(guān)鍵詞：外源性硫化氫調(diào)節(jié)肺炎支原體LAMPs誘生血紅素氧合酶-1和促炎癥細(xì)胞因子

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【摘要】：[目的]觀察外源性硫化氫(H_2S)對(duì)肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,Mp)脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(lipid-associated membrane proteins,LAMPs)誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1分泌血紅素氧合酶-1(heme oxygenase,HO-1)、白細(xì)胞介素6(interleukine 6,IL-6)和白細(xì)胞介素8(interleukine 6,IL-8)的影響,并探討其調(diào)控機(jī)制,為進(jìn)一步研究Mp與宿主細(xì)胞相互作用提供理論依據(jù)。[方法]體外培養(yǎng)Mp標(biāo)準(zhǔn)株M129,低溫高速離心收集菌體并提取Mp LAMPs,用BCA法測(cè)定其濃度。體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,用5μg/mL Mp LAMPs刺激硫氫化鈉(sodium hydrosulfide,NaHS)預(yù)處理和未處理的THP-1細(xì)胞,ELISA檢測(cè)各組IL-6和IL-8的表達(dá)水平。Western blot檢測(cè)HO-1和細(xì)胞漿、細(xì)胞核內(nèi)核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2)的表達(dá)水平;用Mp LAMPs分別刺激NaHS、ERK抑制劑PD98059、p38抑制劑SB203580、JNK抑制劑SP600125和NF-κB特異性抑制PDTC預(yù)處理和未處理的的THP-1細(xì)胞,Western blot檢測(cè)ERK、p38、JNK及核因子κB(NF-κB)的抑制蛋白IκB-α(inhibitor of NF-κB,IκBα)的磷酸化蛋白和總蛋白。用LAMPs刺激用Na HS和NF-κB特異性抑制PDTC預(yù)處理的THP-1細(xì)胞,ELISA檢測(cè)各組IL-6和IL-8的表達(dá)。[結(jié)果](1)Mp LAMPs刺激用NaHS預(yù)處理的THP-1細(xì)胞后,HO-1的表達(dá)量比NaHS未處理組細(xì)胞增加了41.18%。IL-6和IL-8的分泌分別減少了19.02%、11.56%。(2)LAMPs誘導(dǎo)的NaHS預(yù)處理THP-1細(xì)胞較LAMPs直接作用的細(xì)胞Nrf2在胞漿中表達(dá)減少了16.67%,胞核內(nèi)表達(dá)增加了27%。(3)Mp LAMPs刺激NaHS預(yù)處理和未處理的THP-1細(xì)胞后,NaHS處理組ERK、p38、JNK的磷酸化水平減少了27.14%、16.67%、31.00%,PD98059組、SB203580組、SP600125組分別被抑制了28%、42.5%、40.2%。(4)NaHS預(yù)處理THP-1細(xì)胞使得Mp LAMPs誘導(dǎo)的IκB-α的磷酸化水平降低了17.65%;LAMPs刺激用NaHS和NF-κB特異性抑制PDTC預(yù)處理的THP-1細(xì)胞,IL-6的分泌分別被抑制了24.69%、30.43%,IL-8的分泌分別被抑制了36.17%、36.25%。[結(jié)論](1)外源性硫化氫可通過(guò)抑制MAPKs/NF-κB信號(hào)途徑減少M(fèi)p LAMPs誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞分泌IL-6和IL-8;(2)外源性硫化氫通過(guò)激活Nrf2的核轉(zhuǎn)位促進(jìn)Mp LAMPs誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞表達(dá)HO-1。
【關(guān)鍵詞】：肺炎支原體 脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白 核因子E2相關(guān)因子2 核因子κB 硫化氫
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R375.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要縮略語(yǔ)英文索引9-12
• 第1章 前言12-18
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.2 支原體菌株19
• 2.3 細(xì)胞株19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑19
• 2.5 主要抗體19-20
• 2.6 培養(yǎng)基及溶液配制20-21
• 2.7 其他21-22
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存與復(fù)蘇22-23
• 3.2 Mp LAMPs的抽提，內(nèi)毒素及濃度測(cè)定23-25
• 3.3 ELISA檢測(cè)IL-6、IL-8 的表達(dá)水平25-27
• 3.4 Western Blot檢測(cè)HO-1、Nrf2蛋白以及IκB-α、ERK、JNK、p38蛋白的磷酸化水平的表達(dá)27-30
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-40
• 4.1 NaHS促進(jìn)肺炎支原體LAMPs誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞表達(dá)HO-130-31
• 4.2 NaHS在LAMPs誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞Nrf2核轉(zhuǎn)位中起協(xié)同作用31-33
• 4.3 NaHS抑制Mp LAMPs誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞分泌IL-6 和IL-833-34
• 4.4 NaHS抑制Mp LAMPs激活THP-1 細(xì)胞中的MAPKs信號(hào)通路34-36
• 4.5 NaHS抑制Mp LAMPs誘導(dǎo)的THP-1 細(xì)胞IκB-α 的磷酸化并減少I(mǎi)L-6 和IL-8 的分泌36-40
• 第5章 討論40-43
• 第6章 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 綜述49-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果57-58
• 資助本論文的科研項(xiàng)目58-59
• 致謝59

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1 劉R，

本文編號(hào)：644955