本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體在人角質(zhì)形成細(xì)胞基因組中的整合位點(diǎn)分析

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【摘要】：目的檢測(cè)慢病毒載體(lentiviral vector)在人角質(zhì)形成細(xì)胞基因組中的整合位點(diǎn),初步分析慢病毒載體在表皮細(xì)胞基因組中的整合位點(diǎn)分布規(guī)律。方法以本課題組前期研究中構(gòu)建的慢病毒載體感染的人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞系為研究對(duì)象,應(yīng)用連接介導(dǎo)PCR(ligation-mediated PCR,LM-PCR)技術(shù)克隆慢病毒載體在其基因組中的整合位點(diǎn)序列,測(cè)序克隆片段后經(jīng)在線工具GTSG-QuickMap在人類(lèi)基因組上定位,從而得到整合位點(diǎn)。再?gòu)恼衔稽c(diǎn)分布與染色體、基因及其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的關(guān)系來(lái)分析慢病毒載體在人角質(zhì)形成細(xì)胞基因組中的整合傾向性。結(jié)果對(duì)1 148個(gè)陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子DNA測(cè)序及定位分析,共得到199個(gè)整合位點(diǎn)。與GTSG-QuickMap模擬的隨機(jī)對(duì)照相比,慢病毒載體的整合頻率在第4、5、15、16號(hào)染色體上、基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游5 kb至50 kb范圍內(nèi)顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。結(jié)論慢病毒載體傾向于整合在人角質(zhì)形成細(xì)胞基因組中的基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近區(qū)域,而并不傾向于整合在基因內(nèi)部的整合模式。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍燒傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒載體 人角質(zhì)形成細(xì)胞 連接介導(dǎo)PCR 整合位點(diǎn) 整合頻率 整合傾向
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81071575) 國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室Ⅰ類(lèi)課題(SKLZZ200904)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R346
【正文快照】： 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是常用的外源基因整合載體,對(duì)基因治療和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究具有重要價(jià)值。但是,目前逆轉(zhuǎn)錄病毒載體尚不能將目的基因插入特定位點(diǎn),當(dāng)該類(lèi)載體異位整合于靶細(xì)胞染色體基因組中,原病毒(provirus)與宿主(host)之間相互作用,極有可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因表達(dá)沉默及插入性誘變(in

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：635263