本文關(guān)鍵詞：小鼠子宮珠蛋白結(jié)合蛋白的生物信息學分析及其多克隆抗體制備

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【摘要】：本文旨在制備小鼠子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(mouse uteroglo binbinding protein,mUGBP)多克隆抗體,為后續(xù)研究工作奠定基礎(chǔ)。通過生物信息學分析方法預測mUGBP蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)、理化特性、疏水性等因素,設(shè)計出兩段多肽,分別與匙孔戚血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)交聯(lián)后免疫新西蘭兔,結(jié)果顯示其中一個含13個氨基酸殘基的多肽序列(221st～233rd)可用作抗原免疫動物,并成功獲得高效價的抗mUGBP多克隆抗體。通過ELISA法檢測其效價為1:108,親和層析純化后Westernblot檢測抗體特異性,并將制備的抗體應用于免疫印跡及人和小鼠肺組織免疫組織化學和免疫熒光檢測,結(jié)果顯示本研究制備的抗體具有特異性,且用該抗體成功在人和小鼠氣道上皮細胞和肺血管內(nèi)皮細胞檢測到UGBP蛋白表達。結(jié)果表明,本研究通過生物信息學方法成功預測了抗原表位,并據(jù)此預測成功制備了高效價、高特異性的抗mUGBP多克隆抗體。
【作者單位】： 中南大學湘雅醫(yī)學院生理學系;長治醫(yī)學院生理學教研室;
【關(guān)鍵詞】： 子宮珠蛋白 小鼠 抗體 生物信息學
【基金】：supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30670770,30870916,81100057) Precision Instruments Sharing Foundation of Central South University,China(No.2012-02,2012-12)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 子宮珠蛋白(uteroglobin,UG)是由襯覆于遠端細支氣管的非纖毛上皮細胞Clara細胞所分泌的一種在進化上保守的小分子蛋白,因最早在兔的子宮內(nèi)膜發(fā)現(xiàn)并由此命名,也稱為Clara細胞分泌蛋白(Clara cell secretory protein,CCSP)、Clara細胞蛋白10(CC10)、Clara細胞蛋白16(CC16),是

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