本文關鍵詞：小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表達及活性鑒定

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【摘要】：目的構建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表達載體,在大腸桿菌中表達,并對mCD40/GST融合蛋白進行純化和抗原活性鑒定。方法從小鼠DC2.4細胞系中擴增目的基因mCD40并克隆至原核表達載體pGEX-6P-1,構建重組表達載體pGEX-6P-1-mCD40,并將該載體轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導表達mCD40/GST融合蛋白,并采用GST瓊脂糖凝膠純化重組蛋白。純化后的重組蛋白經Western blot法、間接ELISA鑒定其抗原活性。結果 PCR擴增產物經測序分析與GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致;重組表達載體經酶切鑒定正確;IPTG誘導后經SDS-PAGE分析證實得到了相對分子質量(M r)為45 000的重組蛋白;Western blot法和ELISA檢測證實純化的mCD40/GST蛋白能夠與特異性抗體發(fā)生反應。結論成功構建了原核表達載體pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表達系統(tǒng)實現(xiàn)了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表達并證明其具有較高的抗原活性。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院泌尿外科;軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;新疆大學生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： CD 原核表達 蛋白純化 活性檢測
【基金】：國家自然科學基金(30840094) 國家高技術研究發(fā)展計劃(863)(2007AA02Z451)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： CD40是一個相對分子質量(Mr)48 000的跨膜糖蛋白細胞表面受體,屬于腫瘤壞死因子(tumor necrosisfactor,TNF)受體超家族成員。最初被發(fā)現(xiàn)于B淋巴細胞,并證明可以誘導B細胞分化增殖[1-2],隨后研究證實CD40同時也表達于單核細胞、樹突狀細胞(dendritic cells,DC)以及其他一些非造

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本文編號：600249