本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：慢病毒載體作為一種有效的生物研究和基因治療載體,近年來(lái)正受到廣泛關(guān)注,而轉(zhuǎn)錄通讀現(xiàn)象則是限制其被使用的主要生物安全性瓶頸之一。為了評(píng)估慢病毒載體在整合入染色體后的轉(zhuǎn)錄通讀的實(shí)際情況,需要建立一種有效的檢測(cè)轉(zhuǎn)錄通讀率的方法。文中運(yùn)用分子生物學(xué)等手段,將相關(guān)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞,模擬野生型和自滅活型慢病毒載體整合入染色體后的情況,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別定量轉(zhuǎn)錄通讀和總轉(zhuǎn)錄本在慢病毒載體上的特征序列,并計(jì)算出轉(zhuǎn)錄通讀率;同時(shí)使用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)等技術(shù),檢測(cè)轉(zhuǎn)錄通讀后的GFP蛋白產(chǎn)物。兩種檢測(cè)結(jié)果均與理論相符,即自滅活型載體具有更高的轉(zhuǎn)錄通讀率。說(shuō)明文中所建立的方法有效可靠,為進(jìn)一步評(píng)估和降低慢病毒載體的轉(zhuǎn)錄通讀率,提高慢病毒載體的生物安全性的研究提供技術(shù)支持。
【作者單位】： 上海市兒童醫(yī)院上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳研究所;衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)胚胎分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨上海市胚胎與生殖工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒載體 自滅活慢病毒載體 轉(zhuǎn)錄通讀率 安全性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81271690) 國(guó)家重大基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(No.2010CB945202) 上海市自然科學(xué)基金(No.11ZR1429900)資助~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 轉(zhuǎn)錄通讀(Read-through)是指RNA聚合酶復(fù)合物在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中遇到轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)(如AAUAAA signal)時(shí)不能被正常終止,而是讀過(guò)終止信號(hào)繼續(xù)轉(zhuǎn)錄下游DNA序列的現(xiàn)象(圖1)。它經(jīng)常發(fā)生在病毒或病毒載體基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程中。目前廣泛使用的第3代慢病毒載體經(jīng)過(guò)了自滅活改造(刪除U3啟動(dòng)子)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馬海燕;方_g聃;張敬之;;應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)重組慢病毒滴度及其感染效率[J];生命科學(xué)研究;2009年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 宋佳蕾;繩秀珍;戰(zhàn)文斌;;免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定魚(yú)類淋巴囊腫病毒(LCDV)滴度[J];中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年05期

2 卜慧蓮;溫曉巖;劉希江;徐懋;曹菲;田學(xué)愎;楊輝;高峰;田玉科;;β-arrestin 2抗基因RNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

3 范霖;馬志昭;高山峨;路建偉;李思光;潘曉靜;;用Fugene6制作高滴度慢病毒方法的優(yōu)化比較[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2011年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 譚曉妮;豬瘟兔化弱毒株在永生化豬血管內(nèi)皮細(xì)胞和牛睪丸細(xì)胞上增殖的比較研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

2 姚偉;穩(wěn)定抑制β-catenin的RNAi真核載體的構(gòu)建及其對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株體內(nèi)外增殖作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張敬之;郭歆冰;謝書(shū)陽(yáng);朱怡文;黃英;王舒;任兆瑞;;用慢病毒載體介導(dǎo)產(chǎn)生綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2006年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姚亞夫;張卓光;周本立;曾立學(xué);劉瑛;王洪彬;廖軼;盧德芬;;麻疹乙腦二聯(lián)減毒活疫苗安全性及免疫原性研究[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2006年03期

2 周海云;江麗君;;人破傷風(fēng)免疫球蛋白及其應(yīng)用[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2006年02期

3 郭習(xí)勤;王棟;王希良;蔣會(huì)婷;黃順軍;韓岳;何維明;;鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V安全性初步研究[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年05期

4 農(nóng)藝;陳修榮;張世京;劉德平;黃月葵;李艷萍;李榮成;;國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口凍干無(wú)佐劑人用狂犬病疫苗的安全性和免疫原性比較[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年02期

5 徐潘生;陳云祥;沈敏;辛艷飛;陳國(guó)燦;張升;張立將;由振強(qiáng);宣堯仙;;人用重組禽流感血凝素疫苗接種大鼠的安全性及免疫原性[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2009年04期

6 李瑤瑤;明恒強(qiáng);;我國(guó)免疫佐劑的研究現(xiàn)狀[J];獸藥與飼料添加劑;2009年05期

7 林海祥;俞永新;;皮卡佐劑和皮卡狂犬病疫苗的安全性[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年01期

8 張美榮;張學(xué)峰;胡建霞;王麗;張桂芝;高宏;苗志敏;王顏剛;;大鼠肌肉注射移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的安全性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年27期

9 任賀;張磊;;拷問(wèn)誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的應(yīng)用前景[J];山東醫(yī)藥;2011年32期

10 徐建青;司靜懿;劉世德;鄭珊珊;;DNA疫苗[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1998年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 倪宏波;王興龍;樸范澤;;豬鏈球菌病多價(jià)滅活疫苗的安全性與免疫效力試驗(yàn)[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

2 王秀文;范玉明;齊衛(wèi)紅;;疫苗臨床前安全性評(píng)價(jià)[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)——第一屆全國(guó)中青年學(xué)者科技論壇論文（摘要）集[C];2004年

3 黃樞;李宗英;;小針刀治療的安全性與解剖關(guān)系[A];針刀醫(yī)學(xué)論文精選[C];1999年

4 劉傳喧;馬清鈞;于秀琴;張艷紅;;口服霍亂rBS-WS疫苗的研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 劉兆平;袁彥平;;基因研究與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究進(jìn)展[A];2006年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 董關(guān)木;;腎綜合征出血熱疫苗研究現(xiàn)狀[A];第七次全國(guó)腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 嚴(yán)英;李盈;周偉生;;輸卵管阻塞動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

8 袁慶豐;姒健敏;;外源性rhEGF促FL細(xì)胞增殖作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及其安全性評(píng)價(jià)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

9 袁慶豐;姒健敏;;外源性rhEGF促FL細(xì)胞增殖作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及其安全性評(píng)價(jià)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11屆全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

10 趙珍珍;金先慶;羅慶;;mdr1基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠單個(gè)核細(xì)胞對(duì)其胞內(nèi)結(jié)構(gòu)影響[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)第七屆全國(guó)小兒腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者　靖九江;我國(guó)大腸癌治療性疫苗研究獲階段結(jié)果[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

2 記者　鈕海東 通訊員　李潔尉;“艾滋病疫苗”研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報(bào);2006年

3 ;國(guó)產(chǎn)艾滋病疫苗臨床初試“過(guò)關(guān)”[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年

4 本報(bào)實(shí)習(xí)記者 胡Z，

本文編號(hào)：598633