本文關鍵詞：人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表達及多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的構建人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表達載體并誘導其表達,制備其蛋白的多克隆抗體。方法聚合酶鏈式反應擴增人工合成的pcsk9 cDNA序列;擴增產物經TA克隆、雙酶切、連接,構建pET-28b-pcsk9表達載體;將重組質粒轉化入大腸桿菌表達菌BL21(DE3)的感受態(tài)細胞中,誘導表達;用純化檢測過的目的蛋白免疫新西蘭兔,最后采集全血收集血清,獲得多克隆抗體,并對該抗體進行免疫印跡及效價測定。結果 PET-28b-pcsk9原核表達載體構建成功,用誘導表達的目的蛋白免疫動物,收集血清獲得多克隆抗體。對多克隆抗體進行純化,免疫印跡檢測結果證明自制多克隆抗體特異性良好,效價測定為1:13 200。結論成功構建了pcsk9原核表達載體pET-28b-pcsk9,且獲得了其蛋白的多克隆抗體。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;
【關鍵詞】： pcsk 表達載體 誘導表達 多克隆抗體
【基金】：廣州市教育局市屬高�？蒲许椖�(10A259) 廣州市屬高校教學團隊項目(穗教高教2012-16號)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 高膽固醇血癥是目前威脅現(xiàn)代人類健康的一大疾病,是環(huán)境、遺傳等多因素相互作用引起的復雜性疾病⑴。血漿中低密度脂蛋白膽固醇(low densitylipoprptein cholesterol,LDL-C)水平的異常升高是其發(fā)生的最主要原因,所以合理地控制LDL-C的血漿水平則是預防和治療此病的關鍵所在。

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本文編號：591310