發(fā)布時(shí)間：2017-07-19 08:28

  本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲(chóng)TOM34基因的克隆和表達(dá)分析

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【摘要】：目的克隆、表達(dá)日本血吸蟲(chóng)線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)酶34基因(SjTOM34),并對(duì)其生物特性進(jìn)行初步研究。方法應(yīng)用RT-PCR方法從42d日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA中擴(kuò)增SjTOM34基因,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸蟲(chóng)不同發(fā)育階段蟲(chóng)體中的表達(dá)狀況。構(gòu)建了SjTOM34基因重組原核表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),Western blotting分析了重組抗原的免疫原性及該蛋白在不同發(fā)育階段蟲(chóng)體中的表達(dá)情況,利用免疫組化方法觀察了該蛋白在蟲(chóng)體內(nèi)的分布情況。結(jié)果獲得了SjTOM34的基因序列,其開(kāi)放閱讀框(ORF)為1 083bp。該基因在所檢測(cè)的不同發(fā)育階段童蟲(chóng)和成蟲(chóng)中均有表達(dá),其中在35d蟲(chóng)體中的表達(dá)量略高于其他時(shí)期的蟲(chóng)體。成功構(gòu)建了重組的原核表達(dá)質(zhì)粒并且在大腸桿菌中獲得表達(dá),重組蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有較好的免疫原性,在所檢測(cè)的各時(shí)期蟲(chóng)體中均可檢測(cè)到該蛋白的存在,并且主要分布在蟲(chóng)體的實(shí)質(zhì)組織中。結(jié)論獲得了日本血吸蟲(chóng)SjTOM34基因,初步明確了該基因在日本血吸蟲(chóng)童蟲(chóng)和成蟲(chóng)中的表達(dá)情況,及在成蟲(chóng)中的分布。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家防治動(dòng)物血吸蟲(chóng)病專業(yè)實(shí)驗(yàn)室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲(chóng) 線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)酶 克隆 表達(dá) 免疫定位
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31172315) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))專項(xiàng)(No.200903036) 中國(guó)博士后科學(xué)基金(No.2012M510630)聯(lián)合資助~~
【分類號(hào)】：R383.2
【正文快照】： Cloning,expression and characterization of a gene encoding translocaseof the outer mitochondrial membrane 34(TOM34)in Schistosoma japonicumHONG Yang1,LI Xue-zhen1,2,FU Zhi-qiang1,SHI Yao-jun1,LU Ke1,YANG Jian-mei 1,ZHU Chuan-gang1,YUAN Chun-xiu1,LI Hao1,

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6 郭潤(rùn)芳;疏綿狀嗜熱絲孢菌熱穩(wěn)定幾丁質(zhì)酶純化及其編碼基因的克隆與表達(dá)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 杜曉惠;雞多趾候選基因的SNPs及表達(dá)差異研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 康巧珍;幽門(mén)螺桿菌中性白細(xì)胞激活蛋白基因克隆表達(dá)及免疫評(píng)價(jià)[D];鄭州大學(xué);2005年

9 張運(yùn)雄;歐文氏桿菌CXJZ95-198非纖維素降解特性及manA基因的克隆研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

10 關(guān)良;重組人TRAIL及突變體的原核表達(dá)和抗腫瘤生物活性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭煥成;產(chǎn)納豆激酶菌株的篩選及納豆激酶酶原基因的克隆與表達(dá)研究[D];吉林大學(xué);2005年

2 劉茜;水稻蛋白激酶的克隆及體外表達(dá)[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 汪雪峰;球形幽門(mén)螺桿菌vacA、cagA基因克隆及序列分析[D];安徽理工大學(xué);2005年

4 胡曉航;銀狐生長(zhǎng)激素基因克隆與基因表達(dá)研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2005年

5 張瑞華;禽流感病毒血凝素基因的克隆、表達(dá)及亞型診斷方法的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 邱重晏;酸性蛋白酶基因的克隆及表達(dá)[D];江南大學(xué);2005年

7 孫樹(shù)民;旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)p53 kDa和p45 kDa抗原基因的克隆、表達(dá)及鑒定[D];吉林大學(xué);2006年

8 柯曉靜;黑曲霉WP1植酸酶基因的克隆及在畢赤酵母中的表達(dá)[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 李旺;耐熱纖維素酶產(chǎn)生菌的篩選、鑒定及纖維素酶基因的克隆與表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

10 萬(wàn)修紅;鐮形扇頭蜱IgG結(jié)合蛋白基因的克隆及表達(dá)[D];上海師范大學(xué);2007年

本文編號(hào)：561958