本文關(guān)鍵詞：小鼠β-防御素3的原核表達(dá)、表達(dá)條件優(yōu)化及其抗菌活性

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【摘要】：目的運用基因工程方法獲得重組小鼠β-防御素3(MBD3),優(yōu)化表達(dá)條件,并研究其抗菌活性。方法通過反轉(zhuǎn)錄PCR方法從小鼠肺組織中擴增Mbd3基因,構(gòu)建其原核表達(dá)質(zhì)粒,將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸埃希菌表達(dá)菌株Rosetta-gami(2)。優(yōu)化融合蛋白的表達(dá)條件。通過親和層析、凝血酶酶切、超濾濃縮得到MBD3的重組成熟肽(rMBD3),并采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳和Western blot鑒定其正確性。采用微量液體抗菌實驗檢測rMBD3對多種常見病原性細(xì)菌和真菌的抗菌活性。結(jié)果獲得表達(dá)MBD3融合蛋白(fMBD3)的工程菌,fMBD3的表達(dá)量可達(dá)菌體總蛋白的62.9%,可溶性fMBD3約為1.15g/L。純化的rMBD3對單細(xì)胞真菌和革蘭陽性菌顯示出較好的抑菌活性。結(jié)論 rMBD3具有一定的抗菌活性,為進(jìn)一步研究該多肽的其他生物學(xué)活性及其應(yīng)用提供參考依據(jù)。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心基礎(chǔ)與法醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠β-防御素 原核表達(dá)
【基金】：貴州省科技廳聯(lián)合基金項目[黔科合(2010)3143]
【分類號】：R392
【正文快照】： 防御素屬于抗微生物肽家族,其特征為小分子陽離子短肽,富含β片層折疊,有6個半胱氨酸形成的3個鏈內(nèi)二硫鍵。根據(jù)在半胱氨酸殘基間二硫鍵連接的位置不同,可以將防御素分為α、β和θ三個亞家族。其中,β-防御素以結(jié)構(gòu)性表達(dá)或誘導(dǎo)性表達(dá)方式存在于機體表皮和黏膜組織內(nèi),發(fā)揮著

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 江滟;王保寧;楊曉芳;李婉宜;劉馮歡;蔣忠華;李明遠(yuǎn);;小鼠β防御素3在大腸桿菌中的融合表達(dá)及其抗菌作用的初步研究[J];西部醫(yī)學(xué);2009年07期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李囡;范紅;;侵襲性真菌感染的流行現(xiàn)狀及快速分子檢測技術(shù)[J];四川醫(yī)學(xué);2008年03期

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本文編號：548319