本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建人三葉因子3腺病毒載體對(duì)膽管上皮細(xì)胞遷移的調(diào)控作用

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【摘要】：目的構(gòu)建含有人三葉因子3(trefoil factor family 3,TFF3)基因的腺病毒載體,并觀察其對(duì)膽管上皮細(xì)胞遷移的調(diào)控作用。方法利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因TFF3全長(zhǎng)進(jìn)行擴(kuò)增,測(cè)序后亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒構(gòu)建載體pAdTrack-CMV-TFF3,轉(zhuǎn)化至含腺病毒骨架質(zhì)粒pAd-Easy的大腸桿菌株BJ5183感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行同源重組,篩選重組子并經(jīng)內(nèi)切酶PacⅠ線性化,轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝及擴(kuò)增,并進(jìn)行滴度測(cè)定。構(gòu)建的TFF3腺病毒載體感染人膽管上皮細(xì)胞后用RT-PCR及Western blot檢測(cè)目的基因表達(dá)水平,并進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力的變化。結(jié)果成功擴(kuò)增了大小約為458 bp的人TFF3基因,測(cè)序報(bào)告顯示目的基因序列與NCBI報(bào)道一致;成功構(gòu)建了TFF3的同源重組腺病毒穿梭載體,經(jīng)293細(xì)胞包裝及擴(kuò)增的病毒滴度為1.3×109CPU/mL。RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染人膽管上皮細(xì)胞后其TFF3表達(dá)明顯增強(qiáng),細(xì)胞遷移能力也明顯高于對(duì)照組。結(jié)論成功構(gòu)建含TFF3基因的腺病毒載體,為進(jìn)一步研究TFF3在膽管上皮損傷修復(fù)中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍肝膽外科研究所;
【關(guān)鍵詞】： TFF基因 腺病毒載體 重組 損傷修復(fù) 細(xì)胞遷移
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30972948)~~
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 三葉因子3(trefoil factor family 3,TFF3)屬三葉肽家族成員之一,其單聚體相對(duì)分子質(zhì)量為6.7×103。編碼人TFF3的基因位于21號(hào)染色體長(zhǎng)臂21q22.3區(qū),其cDNA全長(zhǎng)為222 bp,共編碼73個(gè)氨基酸,前14個(gè)為信號(hào)肽,后59個(gè)為成熟氨基酸。生理狀態(tài)下,TFF3主要高表達(dá)于大腸、小腸及胃竇黏

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本文編號(hào)：533886