本文關鍵詞：MSCs與去分化MSCs在成骨分化過程中免疫原性上調的研究

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【摘要】：目的:比較間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)與去分化間充質干細胞(De-differentiated mesenchymal stem cells,De-MSCs)的成骨分化潛能,并探究MSCs與De-MSCs在成骨分化過程中免疫原性的改變及其分子機制。方法:用酶消化法從人胎盤中分離得到MSCs,經鑒定后,采用更換培養(yǎng)基的方法誘導得到De-MSCs,并對De-MSCs鑒定后用于實驗。(1)比較MSCs與De-MSCs的成骨分化潛能,用CCK8法檢測MSCs與De-MSCs成骨誘導7d過程中的增殖效率;MSCs與De-MSCs進行成骨誘導7d后分別得到Ob-MSCs和Re-MSCs,實時熒光定量PCR(q-PCR,SYBR Green法)檢測成骨相關基因的表達;ALP染色比較MSCs與De-MSCs成骨分化的效率。(2)采用流式細胞術(FCM)檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs表面協(xié)同刺激分子的表達情況;并將4種細胞與T細胞進行共培養(yǎng),CCK8法檢測T細胞的增殖,檢測MSCs與De-MSCs在體外成骨分化過程中免疫原性的改變。(3)將絲裂霉素C處理的MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs通過皮下植入免疫BALB/c小鼠,免疫5d后,眼眶靜脈取外周血,采用FCM檢測外周血單核細胞(PBMCs)中免疫細胞群的活化情況;免疫7d后,采用FCM檢測小鼠脾臟細胞中免疫細胞群的活化情況,檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs對小鼠的致敏情況。(4)實時定量PCR(q-PCR,Taqman探針法)檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs中與免疫(mi R-125b和mi R-296)和成骨(mi R-20a和mi R-29b)相關的micro RNA(mi RNA)的表達情況。結果:(1)De-MSCs與MSCs具有相似的細胞形態(tài)、干細胞標志與多向分化潛能。CCK8法檢測細胞增殖顯示出在成骨誘導7d的過程中,De-MSCs較MSCs有更高的增殖效率。q-PCR結果顯示Re-MSCs中成骨相關基因BMP2,COL1和Runx2的表達較Ob-MSCs明顯增高。ALP染色顯示De-MSCs較MSCs具有更強的成骨能力。(2)流式結果顯示,MSCs與De-MSCs體外成骨分化的過程中,正性共刺激分子的表達明顯增高,負性共刺激分子的表達明顯下降,且這種現(xiàn)象在De-MSCs中表現(xiàn)的更加明顯�；旌狭馨图毎磻�(MLR)顯示,MSCs與De-MSCs可以抑制T細胞的增殖,但成骨分化后抑制T細胞增殖的程度降低,且Re-MSCs組T細胞的增殖效率高于Ob-MSCs組。(3)PBMCs的流式結果顯示,分化的Ob-MSCs和Re-MSCs致敏小鼠后,PBMCs中的T細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞和B細胞的活化效果均要高于相應的未分化的MSCs和De-MSCs致敏的小鼠。同時,Re-MSCs致敏的效果高于Ob-MSCs組。以上現(xiàn)象在脾臟細胞的流式結果中體現(xiàn)的更加明顯。(4)mi R-20a和mi R-29b與成骨有關,而mi R-125b與mi R-296與免疫調節(jié)有關。q-PCR結果顯示,mi R-20a和mi R-125b在MSCs與De-MSCs成骨分化的過程中表達下調,而mi R-29b和mi R-296在成骨分化的過程中表達上調,且mi RNAs在De-MSCs分化過程中表達下調與上調的幅度均明顯高于MSCs。結論:De-MSCs具有與MSCs相似的形態(tài)、干細胞標志與多向分化潛能,且與MSCs相比具有更高的成骨分化潛能。MSCs與De-MSCs都具有低免疫原性,但是經體外成骨分化后其免疫原性上調,且De-MSCs上調的程度更高。MSCs與De-MSCs成骨分化過程中免疫原性的上調與mi RNA有關。提示De-MSCs可替代MSCs應用于組織工程和再生醫(yī)學,但需要考慮其在分化過程中免疫原性的改變對移植效果的影響。
【關鍵詞】：間充質干細胞 去分化間充質干細胞 成骨 免疫原性 miRNA
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-12
• 引言12-17
• 參考文獻14-17
• 第一部分MSCs與De-MSCs的生物學特性及成骨潛能的比較17-31
• 1 材料與方法17-23
• 2 結果23-27
• 3 討論27-28
• 參考文獻28-31
• 第二部分MSCs與De-MSCs誘導成骨分化過程中免疫原性的變化31-42
• 1 材料與方法31-33
• 2 結果33-38
• 3 討論38-40
• 參考文獻40-42
• 第三部分 與MSCs和De-MSCs的免疫和成骨相關的miRNA的研究42-48
• 1 材料與方法42-44
• 2 結果44-45
• 3 討論45-46
• 參考文獻46-48
• 總結與展望48-49
• 綜述49-62
• 參考文獻57-62
• 碩士研究生期間完成的論文62-63
• 課題資助63-64
• 中英文對照縮略詞表64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Jie-fei Shen;Atsunori Sugawara;Joe Yamashita;Hideo Ogura;Soh Sato;;Dedifferentiated fat cells: an alternative source of adult multipotent cells from the adipose tissues[J];International Journal of Oral Science;2011年03期

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本文編號：520339