本文關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體的制備及其活性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備副溶血性弧菌鞭毛蛋白單克隆抗體(mAb)并建立雙抗夾心ELISA。方法采用差速離心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此為抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效價(jià)達(dá)到1∶32 000時(shí),取脾細(xì)胞與生長(zhǎng)良好的對(duì)數(shù)期Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。多次克隆化培養(yǎng)后獲得雜交瘤細(xì)胞株并制備腹水,純化后得到抗體。結(jié)果獲得6株持續(xù)、穩(wěn)定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的雜交瘤細(xì)胞株,命名為VpNo.1～VpNo.6,抗體效價(jià)高達(dá)1∶2×106。對(duì)抗體進(jìn)行了Ig類和亞類檢測(cè)以及Western blot法鑒定,其Ig亞類依次為IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE結(jié)果顯示,提取出的鞭毛蛋白相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為42 000并且純度較高。采用VpNo.6抗體建立了副溶血性弧菌雙抗夾心ELISA,該方法的檢測(cè)靈敏度達(dá)到103CFU/mL菌液,通過(guò)采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明134株副溶血性弧菌呈陽(yáng)性反應(yīng),74株非副溶血性弧菌呈陰性反應(yīng),VpNo.6抗體具有非常好的特異性。在基質(zhì)添加試驗(yàn)中,最低檢出限為21 CFU/g樣品。結(jié)論成功制備了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并將其應(yīng)用于雙抗夾心ELISA,該方法的檢測(cè)靈敏度達(dá)到1×103CFU/mL菌液,與所測(cè)試的非副溶血性弧菌沒(méi)有交叉反應(yīng)。
【作者單位】： 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局;北京農(nóng)學(xué)院;北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【關(guān)鍵詞】： 副溶血性弧菌 鞭毛蛋白 單克隆抗體 雙抗夾心ELISA
【基金】：質(zhì)檢總局公益項(xiàng)目(201110034) 國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2009IK184)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： )副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一種重要的食源性致病菌,分布在世界各地,通常存在于海水浮游生物和魚貝類中,人們多因食用污染本菌而又未經(jīng)良好加工的海產(chǎn)品而引起食物中毒,癥狀為腹瀉、腸痙攣、嘔吐等,重癥患者還會(huì)脫水、休克昏迷,甚至死亡[1-2]。目前,副溶血

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本文編號(hào)：499558