發(fā)布時(shí)間：2017-06-26 18:10

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)及多向分化潛能的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSC)的體外分離培養(yǎng)鑒定方法及多向分化潛能。方法應(yīng)用Ⅱ型膠原酶和透明質(zhì)酸酶聯(lián)合消化法及組織貼塊培養(yǎng)法對(duì)hUCMSC進(jìn)行體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察不同方法獲得的hUCMSC的生長(zhǎng)特點(diǎn);臺(tái)盼藍(lán)法測(cè)定細(xì)胞傳代成活率;采用生長(zhǎng)曲線、MTT法測(cè)定hUCMSC的增殖、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定細(xì)胞周期變化及細(xì)胞免疫表型變化;采用相應(yīng)試劑盒鑒定其向成脂細(xì)胞、成骨細(xì)胞的分化,采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)向成心肌樣細(xì)胞的分化、采用熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)hUCMSC向血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化。結(jié)果酶消化法分離培養(yǎng)的細(xì)胞1 d后,在倒置相差顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞貼壁呈圓形生長(zhǎng),4 d后生長(zhǎng)迅速呈長(zhǎng)梭形,7 d后由中心向周?chē)L(zhǎng)且增殖明顯,10 d后達(dá)80%融合即可傳代;貼塊法培養(yǎng)的細(xì)胞7 d后,可見(jiàn)細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出,10 d后細(xì)胞數(shù)量逐漸增多,16 d后細(xì)胞生長(zhǎng)迅速呈單層致密排列即可傳代,細(xì)胞傳代成活率均為96%以上。2種方法獲得的第3代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線近似"S"形、MTT法顯示3~5 d細(xì)胞增殖較明顯;酶消化法培養(yǎng)的細(xì)胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分別為88.78%和10.21%,組織貼塊法培養(yǎng)的細(xì)胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分別為84.82%和13.87%,細(xì)胞DNA周期無(wú)明顯差異;2種方法獲得的細(xì)胞經(jīng)FCM檢測(cè)CD90、CD105、CD73陽(yáng)性率均為99%以上為高表達(dá);CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA-DR低表達(dá);2種方法獲得的細(xì)胞在體外誘導(dǎo)都能向成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、成心肌樣細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞分化,其誘導(dǎo)陽(yáng)性率均為90%以上。結(jié)論酶消化法和貼塊法均可高效獲得hUCMSC,與貼塊法培養(yǎng)相比較,酶消化法能更有效的獲得擴(kuò)增迅速、細(xì)胞成分單一的細(xì)胞。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院;北京市心肺血管疾病研究所分子生物學(xué)研究室;北京市心肺血管疾病研究所實(shí)驗(yàn)中心;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心外科;
【關(guān)鍵詞】： 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 原代培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81070077) 省部共建重點(diǎn)教育部心血管重塑相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(110267) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助項(xiàng)目(2012D003034000009) 北京市自然科學(xué)基金(7072012)
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells,MSC)來(lái)源于發(fā)育早期中胚層,廣泛存在于骨髓、脂肪、臍血等多種組織中[1-2],具有自我更新,高度增殖及多向分化潛能的成體干細(xì)胞[3-4],MSC逐漸成為替代治療和基因治療領(lǐng)域中極具實(shí)用價(jià)值的細(xì)胞來(lái)源,在組織工程領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。近年

【參考文獻(xiàn)】

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3 朱少芳;何援利;付霞霏;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和超微結(jié)構(gòu)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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2 梁軍;Wharton's jelly間質(zhì)干細(xì)胞分化為膽堿能神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2013年

3 牧仁;北京油雞胚胎肝臟來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 朱天琦;GDNF和NT-3雙基因誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 茍麗娟;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞過(guò)程中microRNA作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 陳書(shū)連;1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的作用研究 2、成人急性淋巴細(xì)胞白血病自體移植的臨床研究及相關(guān)預(yù)后因素[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 關(guān)劍;胰腺癌間充質(zhì)干細(xì)胞樣腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞功能研究及維甲酸對(duì)腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞抑制性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 楊舟鑫;CD106是具有強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能的胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)志[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 付蘇;脂肪來(lái)源基質(zhì)血管成分細(xì)胞與脂肪顆粒共移植后的生物學(xué)轉(zhuǎn)歸[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 王有為;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞臨床前安全性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王思平;肌肉注射異種臍帶間充質(zhì)細(xì)胞對(duì)健康Wistar大鼠心肌VEGF、cTnI表達(dá)及血清VEGF、HGF、IGF-1和GM-CSF的影響[D];青島大學(xué);2012年

2 李柳;誘導(dǎo)hUC-MSCs和VECs轉(zhuǎn)化為角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2012年

3 徐善慧;三種病毒載體對(duì)人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果及基因表達(dá)的對(duì)比研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 武爽;魯西黃牛臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

5 李敏;肋軟骨膜、肋軟骨和骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的比較[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 張培培;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦缺血損傷大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

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8 顧麗亞;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞exosome對(duì)自身心肌分化及抗凋亡實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

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10 徐揚(yáng)陽(yáng);重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)脂肪干細(xì)胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 袁源;楊樹(shù)源;韓忠朝;張曉輝;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和向神經(jīng)元樣細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的研究[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

2 張勇,蔡振杰,陳如坤;小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外分化為前體心肌細(xì)胞的初步實(shí)驗(yàn)[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

3 伍長(zhǎng)學(xué);張爾永;楊思遠(yuǎn);馬建e

本文編號(hào)：487088