本文關鍵詞：類泛素折疊修飾蛋白在內(nèi)皮細胞炎癥反應中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究旨在探討類泛素折疊修飾蛋白Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細胞炎癥反應中的表達及作用,并進一步探討其可能的分子機制。方法:免疫熒光法觀察Ufm1在內(nèi)皮細胞中的表達和定位。使用濃度為100ng/ml的脂多糖LPS體外處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞系HUVECs,分別刺激0h、3h、6h、12h、24h、48h后,采用Real-Time PCR檢測炎性細胞因子(TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1)和Ufm1的m RNA水平,同時通過Western blotting檢測Ufm1蛋白水平的變化。另外,構建Ufm1過表達質(zhì)粒,轉染質(zhì)粒至HUVECs,經(jīng)LPS刺激3h后,采用Real-Time PCR檢測各組中上述炎性細胞因子的變化。Western blotting法檢測NF-κB的總蛋白表達量及其入核量,以探討Ufm1抑制HUVECs炎性細胞因子表達的可能分子機制。結果:Ufm1蛋白在HUVECs的細胞核和細胞質(zhì)中均有表達。在LPS誘導HUVECs炎癥反應中,主要炎性細胞因子TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1的m RNA水平隨著時間變化而升高,并且在刺激后3-6h達到高峰,且有統(tǒng)計學差異(p0.05)。同時,Ufm1的m RNA水平和蛋白表達量也隨著時間的變化而上調(diào),且具有時間依賴性。過表達Ufm1后,LPS誘導產(chǎn)生的相關炎性細胞因子表達量顯著降低。與對照組相比,Toll樣受體通路中NF-κB P65在LPS刺激后入核增多,但過表達Ufm1后p65入核減少。結論:Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVECs中存在表達,并定位于細胞核和細胞質(zhì);在LPS誘導的HUVECs炎癥反應中,Ufm1的m RNA及蛋白水平均上調(diào);Ufm1過表達可顯著抑制LPS誘導的HUVECs炎性細胞因子的表達;Ufm1可能通過TLR4-NF-κB信號通路發(fā)揮抑制內(nèi)皮細胞炎癥反應的作用。
【關鍵詞】：類泛素折疊修飾蛋白 脂多糖 炎癥反應 NF-?B 動脈粥樣硬化
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R364.5
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 引言8-13
• 材料與方法13-28
• 1.1 試劑和儀器13-15
• 1.1.1 細胞13
• 1.1.2 主要試劑13-14
• 1.1.3 主要儀器14-15
• 1.2 主要試驗方法15-27
• 1.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞系HUVECs的培養(yǎng)15-16
• 1.2.2 細胞免疫熒光16-17
• 1.2.3 Ufm1質(zhì)粒的擴增、抽提及純化17-19
• 1.2.4 HUVECs細胞干預實驗19-20
• 1.2.5 Real-time PCR檢測HUVECs目的基因的表達20-22
• 1.2.6 Western blotting檢測HUVECs目的蛋白的表達22-25
• 1.2.7 核質(zhì)分離試劑盒檢測NF-kB的表達分布25-27
• 1.3 統(tǒng)計學方法27-28
• 結果28-36
• 討論36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-44
• 致謝44-45
• 附錄A45-46
• 附錄B46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：442352