眼睛是人和動(dòng)物的視覺(jué)器官,其主要包括角膜、晶狀體和視網(wǎng)膜等結(jié)構(gòu),它們的異常發(fā)育會(huì)導(dǎo)致一系列重大眼睛疾病。白內(nèi)障是最常見(jiàn)的致盲性疾病之一,其癥狀表現(xiàn)為眼睛晶狀體出現(xiàn)渾濁進(jìn)而導(dǎo)致視力下降。研究表明,自由基的損傷、晶狀體上皮細(xì)胞凋亡和晶狀體蛋白損傷是導(dǎo)致白內(nèi)障發(fā)生的重要因素。目前治療白內(nèi)障最有效的方法是通過(guò)超聲乳化手術(shù)并植入人工晶狀體,但術(shù)后的并發(fā)癥較嚴(yán)重。年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD:Age-related Macular Degeneration)是由多因素誘發(fā)的老年性眼睛疾病,其特征是視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和感光細(xì)胞的死亡。根據(jù)是否有新生血管出現(xiàn),它可以分為干性和濕性,雖然利用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的抑制劑能用來(lái)處理并緩解濕性黃斑變性,但無(wú)法治愈,而干性黃斑變性無(wú)法治療。因此,探討白內(nèi)障和AMD的發(fā)病機(jī)理及可能的治療靶點(diǎn)是關(guān)系到人類(lèi)健康的重大科學(xué)問(wèn)題。利用在小鼠動(dòng)物模型進(jìn)行白內(nèi)障和AMD的研究具有重要科學(xué)意義。蛋白質(zhì)SUMO化(Sumoylation)是指類(lèi)泛素小分子修飾(small ubiquitin-like modifiers簡(jiǎn)稱(chēng)SUMOs)與其它蛋白相結(jié)合的過(guò)程。SUMO化已成為蛋白質(zhì)翻譯后...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1. 蛋白質(zhì)的SUMO化
        1.1 SUMO化的發(fā)現(xiàn)
        1.2 SUMO化小分子的種類(lèi)
        1.3 SUMO的結(jié)合位點(diǎn)和基序
        1.4 SUMO化連接酶系統(tǒng)
        1.5 SUMO化水解酶系統(tǒng)
        1.6 SUMO化的功能
        1.7 SUMO化與人類(lèi)疾病
    2. 眼睛的發(fā)育
        2.1 晶狀體的發(fā)育
        2.2 視網(wǎng)膜的發(fā)育
    3. 眼睛的重大致盲疾病
        3.1 白內(nèi)障
        3.2 年齡相關(guān)性黃斑變性
第二章 蛋白質(zhì)SUMO化酶系統(tǒng)在眼睛不同組織和不同細(xì)胞系中的分化表達(dá)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料、化學(xué)試劑及儀器設(shè)備
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 化學(xué)試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 小鼠眼球解剖
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 Western blot(蛋白質(zhì)免疫印跡法)
        2.4 熒光定量PCR
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 五種SUMO化酶的mRNA在主要眼睛組織中的表達(dá)模式分析
        3.2 五種SUMO化連接酶蛋白質(zhì)在主要眼睛組織中的分化表達(dá)模式
        3.3 五種SUMO化酶在眼睛五種常用細(xì)胞系中的mRNA和蛋白的表達(dá)分析
        3.4 五種SUMO化酶在眼睛五種常用細(xì)胞系中的核質(zhì)定位
    4. 總結(jié)與討論
第三章 蛋白質(zhì)SUMO化酶在重大眼疾動(dòng)物模型中的分化表達(dá)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料、化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 化學(xué)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 UV和過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的小鼠白內(nèi)障模型
        2.2 碘酸鈉誘導(dǎo)的小鼠AMD模型
        2.3 小鼠眼球石蠟切片HE染色
        2.4 Western blot(蛋白質(zhì)免疫印跡法)
        2.5 熒光定量PCR
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 體外白內(nèi)障模型的建立
        3.2 體外白內(nèi)障模型晶狀體上皮細(xì)胞中SUMO化酶的mRNA表達(dá)水平變化分析
        3.3 體外白內(nèi)障模型晶狀體上皮細(xì)胞中SUMO化酶的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化分析
        3.4 小鼠AMD模型的建立
        3.5 小鼠AMD模型視網(wǎng)膜中SUMO化酶mRNA的表達(dá)水平變化的分析
        3.6 小鼠AMD模型注射一天的視網(wǎng)膜中SUMO化酶蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化的分析
        3.7 小鼠AMD模型注射兩天的視網(wǎng)膜中SUMO化酶蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化的分析
        3.8 小鼠AMD模型注射三天的視網(wǎng)膜中SUMO化酶蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化的分析
    4. 總結(jié)與討論
第四章 蛋白質(zhì)SUMO化連接酶3 PIAS1對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞活性調(diào)控的功能分析
    1. 實(shí)驗(yàn)材料、化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 化學(xué)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 過(guò)氧化氫誘導(dǎo)αTN4-1細(xì)胞凋亡
        2.2 PIAS1質(zhì)粒構(gòu)建
        2.3 Crisp-Cas9構(gòu)建PIAS1敲除的αTN4-1穩(wěn)定細(xì)胞系
        2.4 CellTiter-Glo發(fā)光細(xì)胞活性測(cè)定
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 在過(guò)氧化氫處理的條件下,αTN4-1細(xì)胞中PIAS1的模式表達(dá)
        3.2 Crispr-Cas9技術(shù)質(zhì)粒的選擇
        3.3 PIAS1敲除的αTN4-1細(xì)胞系的鑒定
        3.4 敲除PIAS1在應(yīng)激條件下對(duì)αTN4-1細(xì)胞有保護(hù)作用
        3.5 表達(dá)載體的選擇
        3.6 過(guò)表達(dá)PIAS1在應(yīng)激條件下能夠促進(jìn)αTN4-1細(xì)胞的凋亡
    4. 總結(jié)與討論
第五章 總結(jié)、討論及研究展望
參考文獻(xiàn)
博士期間撰寫(xiě)、發(fā)表的主要論文及獲獎(jiǎng)情況
致謝



本文編號(hào)：4040480