旨在了解AraC家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子 lmo2672對(duì)單核增生李斯特菌(LM)生物被膜(BF)形成的影響。根據(jù)同源重組技術(shù)構(gòu)建LM-△ lmo2672基因缺失株,利用結(jié)晶紫染色法比較LM EGD-e和LM-△ lmo2672在不同溫度、滲透壓、H₂O₂和膽酸鹽環(huán)境中BF形成量的差異;通過qRT-PCR分析上述不同應(yīng)激環(huán)境中BF相關(guān)基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平的變化。研究結(jié)果證實(shí):與LM EGD-e相比,LM-△ lmo2672在4℃,30℃,5%NaCl,8%NaCl,5mmol/L H₂O₂和0.3%膽酸鹽培養(yǎng)環(huán)境中BF形成量顯著降低;在37℃LM-△ lmo2672 BF形成能力極顯著降低;在不同應(yīng)激環(huán)境中,LM-△ lmo2672 BF形成相關(guān)基因的表達(dá)量均出現(xiàn)不同程度下降。研究結(jié)果表明, lmo2672基因在LM BF形成過程中發(fā)揮重要作用。

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圖5LMEGD-e和LM-△lmo2672在不同脅迫環(huán)境中的BF形成

在4℃和30℃,LM-△lmo2672中4個(gè)與BF形成相關(guān)基因的表達(dá)量均顯著低于LMEGD-e(P<0.05)(圖7-A、圖7-B);在高滲透壓環(huán)境中,LM-△lmo2672agrA和agrB基因表達(dá)量顯著低于LMEGD-e(P<0.05)(圖7-C、圖7-D)....

圖6lmo2672基因缺失對(duì)LM在不同時(shí)間BF形成的影響

細(xì)菌BF的形成一般分為初始粘附、不可逆粘附、微菌落形成、成熟、播散期5個(gè)階段[19]。在非生物表面孵化的24h之前是細(xì)菌形成BF粘附的重要時(shí)期,在48h后被認(rèn)為是BF形成的成熟期[10,20]。本研究發(fā)現(xiàn),在37℃培養(yǎng)24h時(shí),LM-△lmo2672缺失株與LMEG....

圖7LMEGD-e和LM-△lmo2672在不同應(yīng)激環(huán)境中BF相關(guān)基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)

圖6lmo2672基因缺失對(duì)LM在不同時(shí)間BF形成的影響B(tài)F形成受多種因素的影響,其中溫度對(duì)BF的形成影響較大[17,21]。DiBonaventura等[17]分析44株LM分離株在不同溫度下BF形成情況,發(fā)現(xiàn)隨著溫度降低,LM形成的BF組織結(jié)構(gòu)越稀疏;Chavant等[2....

圖4LM-△lmo2672缺失株遺傳穩(wěn)定性鑒定

在37℃時(shí),兩株菌所形成的BF沒有顯著差異(P>0.05);但在4℃和30℃,LM-△lmo2672BF生成量均顯著低于LMEGD-e(P<0.05)(圖5-A);在5%和8%NaCl中,與LMEGD-e相比,LM-△lmo2672BF生成量顯著減少(P<....

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