發(fā)布時間：2024-03-20 00:15

　　目的:抗人CD25單克隆抗體(巴利昔單抗)是臨床器官移植常用的免疫誘導(dǎo)治療藥物,雖然理論上其主要通過阻斷T淋巴細(xì)胞激活的第三信號發(fā)揮免疫抑制作用,但其對T細(xì)胞活化、增殖以及細(xì)胞因子分泌的影響卻鮮有報道。本實驗通過在體外建立穩(wěn)定的抗原非特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系及同種異體抗原特異性混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)體系,利用舒萊(巴利昔單抗,Novartis)進(jìn)行干預(yù),觀察舒萊抑制T細(xì)胞活化及增殖反應(yīng)的強度,為闡明巴利昔單抗的免疫學(xué)作用機制提供實驗證據(jù)。方法:體外分別建立抗原特異性人T淋巴細(xì)胞反應(yīng)及抗原非特異性人T淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系。其中抗原非特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)是利用抗人CD3/CD28抗體直接刺激T細(xì)胞活化增殖,刺激后第3天使用抗人CD3、CD4、CD8、CD25及CD69等流式抗體檢測反應(yīng)性T細(xì)胞活化及增殖情況,并留取培養(yǎng)體系的上清做細(xì)胞因子檢測。而抗原特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)則是首先分離不同健康人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),其中一個個體的PBMC作為MLR的反應(yīng)細(xì)胞,另一個體的PBMC進(jìn)行放射照射滅活后作為MLR的刺激細(xì)胞,應(yīng)...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.在T細(xì)胞未活化的對照組中，與正常對照和二抗對照組相比，舒萊結(jié)合組IgG二抗的G.Mean值較高

體外分離人PBMC，與舒萊在4°共孵育30分鐘，之后再加入抗人Ig抗來檢測舒萊在體外與T細(xì)胞的結(jié)合率。結(jié)果如圖1所示，舒萊在體外與T細(xì)胞結(jié)合作用未受影響。且隨著T活化程度的增高，舒萊的結(jié)合率越高。

圖2.因T細(xì)胞增殖存在個體差異，故本實驗T細(xì)胞增殖率以抗人CD3/CD28抗體刺激組為標(biāo)準(zhǔn)，刺激組增殖率記為100%

圖2.因T細(xì)胞增殖存在個體差異，故本實驗T細(xì)胞增殖率以抗人CD3/CD28抗體刺激組為標(biāo)準(zhǔn)，刺激組增殖率記為100%。抗CD3/CD28抗體刺激3天后CD4+T和CD8+T的增殖情況用流式進(jìn)行分析。利用flowjo（流式分析軟件）圈出總淋巴細(xì)....

圖4.通過設(shè)立陰性對照組、單加CD25抗體組和加入舒萊（Simulect）孵育后再加CD25抗

CD25G.Mean值的下降有顯著差異,且由圖可見，低濃度（0.001μg/ml-0.01μg/ml）與不同濃度間CD25G.Mean值也有明顯差異。圖E、F結(jié)果顯示，加入不同濃度舒萊后，CD4+T和CD8+T細(xì)胞表面CD69表達(dá)有所上升，且高濃度組（0.1μg....

圖5.應(yīng)用CBA技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞因子檢測并用Flowjo分析細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ分泌情況

體后檢測CD25流式抗體的結(jié)合情況，并使用流式進(jìn)行分析。可以看到，加入舒萊組和單加CD25流式抗體組CD25流式抗體結(jié)合情況并無差異，提示CD25流式抗體并未與舒萊競爭性結(jié)合。4.使用舒萊后不能抑制T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-2而對分泌IFN-γ有輕微的抑制作用....

本文編號：3932678