本論文包括兩個(gè)相對(duì)獨(dú)立的課題研究?jī)?nèi)容,一是操縱精準(zhǔn)型非同源末端連接(non homologous end joining,NHEJ)實(shí)現(xiàn) CRISPR/Cas9 介導(dǎo)的高效精準(zhǔn)刪除;二是基于CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)建立小鼠原發(fā)性肝癌模型。課題一:前期研究中發(fā)現(xiàn)在I-SceI誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂(double strand break,DSB)修復(fù)中精準(zhǔn)型NHEJ(accurate NHEJ,accNHEJ)占據(jù)總NHEJ 一半以上比例,我們推測(cè)CRISPR/Cas9誘導(dǎo)的NHEJ也可能大部分是精準(zhǔn)型NHEJ。本研究中,利用配對(duì)sgRNA技術(shù)與Cas9在內(nèi)源基因組上誘導(dǎo)兩個(gè)臨近DSB損傷,并評(píng)估了隨后修復(fù)中CRISPR/Cas9誘導(dǎo)的NHEJ,發(fā)現(xiàn)在人和小鼠基因組中發(fā)生的NHEJ也有50%左右屬于精準(zhǔn)型NHEJ。利用該技術(shù)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)類似于I-SceI誘導(dǎo)的NHEJ調(diào)控,NHEJ核心因子X(jué)RCC4推動(dòng)了 CRISPR/Cas9誘導(dǎo)的NHEJ修復(fù)進(jìn)程;與XRCC4敲除時(shí)相比較,XRCC4在其中抑制突變型NHEJ,而且突變型NHEJ中刪除插入(insertion/deletion,...

【文章頁(yè)數(shù)】：152 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)表
前言
第一部分 操縱精準(zhǔn)型非同源末端連接實(shí)現(xiàn)CRISPR/Cas9介導(dǎo)的高效精準(zhǔn)刪除
    1. 引言
    2. 材料與方法
    3. 結(jié)果
    4. 討論
第二部分 基于CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)建立小鼠原發(fā)性肝癌模型
    1. 引言
    2. 材料與方法
    3. 結(jié)果
    4. 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在讀期間取得的科研成果



本文編號(hào)：3919699