發(fā)布時間：2024-02-14 19:08

　　目的建立小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞的Th1和Th2型細(xì)胞因子熒光定量PCR檢測方法。方法依據(jù)GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型細(xì)胞因子的核苷酸序列設(shè)計特異性引物,以RAW264.7巨噬細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板,通過構(gòu)建質(zhì)粒陽性標(biāo)準(zhǔn)品,建立檢測上述細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的real-time PCR方法。結(jié)果用建立的熒光定量PCR方法,檢測牛型布魯氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞Th1和Th2型細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄水平。最低檢測量為102拷貝/μL,線性關(guān)系很好,R2≥0.982,該方法具有良好的特異性和重復(fù)性。結(jié)論成功建立了檢測巨噬細(xì)胞中Th1和Th2型細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的熒光定量PCR方法。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.3 RNA提取、 反轉(zhuǎn)錄及定量
        1.2.4 細(xì)胞因子實時定量PCR檢測方法的建立
        1.2.5 實時定量PCR檢測布魯氏菌感染巨噬細(xì)胞中細(xì)胞因子mRNA含量
2 結(jié)果
    2.1 RAW264.7巨噬細(xì)胞Th1、 Th2型細(xì)胞因子RT-PCR及引物特異性鑒定
    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3 感染布魯氏菌S2308株的巨噬細(xì)胞中6種細(xì)胞因子mRNA的實時熒光定量檢測結(jié)果
3 討論



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