目的本研究主要探討微管切割蛋白Spastin如何調(diào)控AMPA受體GluA1亞基的內(nèi)化。材料與方法首先我們構(gòu)建了Spastin及其截短片段的各種表達(dá)載體,用pull down和Co-IP的實(shí)驗(yàn)方法,明確Spastin和GluA1存在相互作用及其具體結(jié)合部位;然后在海馬神經(jīng)元中觀察Spastin和GluA1在神經(jīng)元中樹(shù)突及樹(shù)突棘的共定位情況;接下來(lái)在GluA1-HEK293T穩(wěn)定細(xì)胞株及海馬神經(jīng)中過(guò)表達(dá)Spastin WT,通過(guò)免疫熒光以及提取細(xì)胞膜蛋白觀察Total GluA1和Surface GluA1的表達(dá)變化,并用全細(xì)胞膜片鉗記錄AMPA電流和mEPSC的變化;最后構(gòu)建Spastin功能域的真核表達(dá)突變體,在穩(wěn)定細(xì)胞株和海馬神經(jīng)元中過(guò)表達(dá),明確Spastin WT及其各功能域?qū)luA1的具體影響。結(jié)果1)通過(guò)pull down和Co-IP實(shí)驗(yàn)中明確Spastin與GluA1存在相互作用,且作用部位位于Spastin的MIT功能域和GluA1的C末端;2)GluA1-HEK293T穩(wěn)定細(xì)胞株及神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)Spastin WT,可抑制細(xì)胞膜GluA1的表達(dá);3)Spastin WT...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
    1.1 神經(jīng)元的突觸傳遞
    1.2 樹(shù)突棘
        1.2.1 突觸的信息傳遞與樹(shù)突棘的關(guān)系
        1.2.2 樹(shù)突棘與AMPA受體的關(guān)系
    1.3 AMPA受體
        1.3.1 AMPA受體的組成
        1.3.2 AMPA受體轉(zhuǎn)運(yùn)
    1.4 Spastin
        1.4.1 Spastin的概述
        1.4.2 Spastin的微管切割功能
        1.4.3 Spastin與膜轉(zhuǎn)運(yùn)
    1.5 研究目的和意義
材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 Spastin與GluA1存在相互作用
    3.2 明確Spastin與GluA1的結(jié)合部位
    3.3 穩(wěn)定細(xì)胞株過(guò)表達(dá)Spastin WT促進(jìn)GluA1內(nèi)化
    3.4 神經(jīng)元過(guò)表達(dá)Spastin WT促進(jìn)GluA1內(nèi)化
    3.5 Spastin的功能域與切割功能
    3.6 穩(wěn)定株中切割功能和MIT共同促進(jìn)GluA1內(nèi)化
    3.7 神經(jīng)元中切割功能和MIT共同促進(jìn)GluA1內(nèi)化
討論
    4.1 Spastin與GluA1的相互作用
    4.2 Spastin促進(jìn)GluA1內(nèi)化
    4.3 Spastin與微管切割
    4.4 Spastin的切割功能及MIT區(qū)促進(jìn)GluA1內(nèi)化
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
主要中英文縮略詞
在讀期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3853654