[背景]噬菌體具有特定的殺菌能力,對生態(tài)和細(xì)菌的進(jìn)化具有重要影響。近年來由于多重耐藥細(xì)菌的全球出現(xiàn),噬菌體療法逐漸引起了人們的關(guān)注。[目的]對一株新型裂解K63莢膜型肺炎克雷伯菌的噬菌體vB_KpnP_IME308進(jìn)行生物學(xué)特性研究、測序和比較基因組學(xué)的分析。[方法]以一株從臨床分離到的肺炎克雷伯菌為宿主菌分離噬菌體,應(yīng)用雙層平板法進(jìn)行噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(optimal multiplicity of infection)、一步生長曲線(one-step growth curve)、溫度以及pH敏感性實驗測定,純化噬菌體并通過透射電鏡觀察噬菌體形態(tài);應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的苯酚-氯仿提取方案提取噬菌體全基因組,使用Illumina MiSeq測序平臺進(jìn)行噬菌體全基因組測序,測序后對噬菌體全基因組序列進(jìn)行組裝、注釋、進(jìn)化和比較基因組學(xué)分析。[結(jié)果]分離到一株新型的肺炎克雷伯菌噬菌體,命名為vB_KpnP_IME308;其最佳感染復(fù)數(shù)為0.001,一步生長曲線結(jié)果顯示,其感染宿主菌的潛伏期約為20 min,裂解期約為80 m...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株來源與培養(yǎng)條件
        1.1.2 培養(yǎng)基及主要試劑和儀器
    1.2 噬菌體的分離鑒定
    1.3 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)測定
    1.4 噬菌體一步生長曲線(one-step growth)的測定
    1.5 噬菌體溫度和p H敏感性的測定
    1.6 噬菌體電鏡
    1.7 噬菌體基因組提取
    1.8 噬菌體的全基因組測序及生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 噬菌體的分離與鑒定
    2.2 噬菌體的形態(tài)學(xué)特征
    2.3 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)
    2.4 噬菌體的一步生長曲線
    2.5 噬菌體溫度和p H的敏感性
    2.6 噬菌體的全基因組分析
    2.7 噬菌體v B＿KpnP＿IME308比較基因組學(xué)分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
3 討論與結(jié)論



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