目的:越來越多的證據(jù)表明植入間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的治療作用不是干細(xì)胞本身而是其分泌的營養(yǎng)因子和細(xì)胞因子介導(dǎo)的。本文從退變髓核和臍帶組織中高效分離培養(yǎng)出MSCs,并對細(xì)胞的生物學(xué)特征進(jìn)行鑒定和比較。進(jìn)一步從細(xì)胞外形、細(xì)胞表型、細(xì)胞增殖能力、三系分化潛能、細(xì)胞多能性及髓核特別標(biāo)志基因表達(dá)等方面去評估人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的條件培養(yǎng)基(UCMSCs-CM)對退變椎間盤髓核干細(xì)胞/祖細(xì)胞(D-NPMSCs)再生能力的影響。方法:采用酶解組織塊法分離提純?nèi)送俗冏甸g盤髓核來源的細(xì)胞,采用組織塊貼壁法分離提純?nèi)四殠чg充質(zhì)干細(xì)胞(UCMSCs),然后進(jìn)行貼壁擴(kuò)增培養(yǎng)至P3代并觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。采用流式細(xì)胞術(shù)驗證細(xì)胞MSC表面標(biāo)志物的特征,比較分析MSC表面標(biāo)志物的陽性細(xì)胞率,并對它們進(jìn)行三系分化能力鑒定及比較。收集UCMSCs的條件培養(yǎng)基體外作用D-NPMSCs,觀察D-NPMSCs的形態(tài)學(xué)變化。進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs和NP細(xì)胞的表面特異性標(biāo)志物、以及細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的表達(dá)。通過生長曲線分析、CCK8和EdU評估D-NPMSCs細(xì)胞活力和增殖能力。通過特異的細(xì)胞化學(xué)染色法測定D-N...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.椎間盤結(jié)構(gòu)
    2.椎間盤退變及病因
    3.椎間盤退變的治療策略
    4.基于UCMSCs治療的旁分泌機(jī)制
    5.本課題的研究思路
第二章 退變椎間盤組織髓核干/祖細(xì)胞與臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的比較
    1.引言
    2.實驗材料
        2.1 實驗樣本
        2.2 實驗試劑
        2.3 實驗儀器及耗材
        2.4 試劑配制
    3.實驗方法
        3.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        3.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面抗原分子的表達(dá)
        3.4 間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨、成脂、成軟骨分化
        3.5 間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
    4.數(shù)據(jù)分析
    5.實驗結(jié)果
        5.1 D-NPMSCs和UCMSCs的形態(tài)學(xué)觀察比較
        5.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測D-NPMSCs與UCMSCs細(xì)胞表面標(biāo)志物及差異比較
        5.3 D-NPMSCs與UCMSCs向成骨、成脂、成軟骨多向分化潛能比較
    6.討論
    7.小結(jié)
第三章 UCMSCs-CM對退變椎間盤髓核來源干/祖細(xì)胞再生能力的影響
    1.引言
    2.實驗材料
        2.1 實驗試劑
        2.2 主要實驗儀器及耗材
        2.3 引物序列
    3.實驗方法
        3.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的收集
        3.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基作用濃度的篩選
        3.3 CM作用后D-NPMSCs的形態(tài)學(xué)觀察
        3.4 流式細(xì)胞術(shù)評估CM作用后D-NPMSCs的表面抗原的表達(dá)
        3.5 CCK8法檢測CM作用后D-NPMSCs的細(xì)胞活性
        3.6 生長曲線評估CM作用后D-NPMSCs的生長趨勢
        3.7 EdU實驗評估CM作用后D-NPMSCs的增殖能力
        3.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測CM作用后D-NPMSCs的細(xì)胞周期變化
        3.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測CM作用后D-NPMSCs的細(xì)胞凋亡變化
        3.10 細(xì)胞特異性化學(xué)染色評估CM作用后D-NPMSCs的多向分化潛能
        3.11 qRT-PCR檢測CM作用后D-NPMSCs相關(guān)基因的表達(dá)
        3.12 western blot檢測ERK蛋白的變化
    4.數(shù)據(jù)分析
    5.實驗結(jié)果
        5.1 UCMSCs-CM作用濃度結(jié)果分析
        5.2 UCMSCs-CM作用后D-NPMSCs的形態(tài)學(xué)變化
        5.3 UCMSCs-CM上調(diào)了D-NPMSCs的MSC表面抗原的表達(dá)
        5.4 UCMSCs-CM促進(jìn)了D-NPMSCs的增殖能力
        5.5 UCMSCs-CM改善了D-NPMSCs的多向分化潛能
        5.6 UCMSCs-CM提高了D-NPMSCs的多能干細(xì)胞基因的表達(dá)
        5.7 UCMSCs-CM改變了NP相關(guān)的特別標(biāo)志物的表達(dá)
        5.8 UCMSCs-CM抑制了ERK的磷酸化
    6.討論
    7.小結(jié)
全文總結(jié)
    1.文中主要小結(jié)
        1.1 人退變椎間盤組織髓核干/祖細(xì)胞與臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的比較
        1.2 UCMSCs-CM對退變椎間盤髓核來源干/祖細(xì)胞的再生能力的影響
    2.本課題的特色和創(chuàng)新
    3.實驗欠缺與不足
參考文獻(xiàn)
中英文縮寫詞
在校期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3832767