泰妙菌素(Tiamulin,TML)是一種半合成的雙萜烯類獸用抗生素,主要用于治療雞慢性呼吸道疾病。TML的規(guī)范使用會很好的發(fā)揮其抗菌效果,但若濫用TML就會在動物源性食品中殘留,進而對人們的健康造成潛在的危害,引發(fā)食品安全與公共衛(wèi)生問題。檢測TML常用的的方法有色譜法、免疫學(xué)技術(shù)等。其中,免疫學(xué)檢測中的試紙檢測方法因其具有敏感、特異、快速、簡便、且可實現(xiàn)現(xiàn)場實時檢測的優(yōu)點被廣泛應(yīng)用。高特異性、高親和力的單克隆抗體的制備,是建立TML免疫學(xué)檢測方法的基礎(chǔ)。本研究根據(jù)TML的結(jié)構(gòu)特點對TML五元環(huán)上的酮羰基進行改造并合成人工完全抗原;免疫小鼠;通過細胞融合技術(shù)與有限稀釋亞克隆技術(shù)研制出高特異性、高敏感性和高親和力的抗TML單克隆抗體,建立能穩(wěn)定分泌抗TML單克隆抗體的細胞株,為建立快速檢測TML的免疫學(xué)方法奠定基礎(chǔ)。用肟化法與活性酯法,將泰妙菌素(TML)與載體蛋白(BSA)偶聯(lián),制備免疫原TML-BSA。同法制備包被原TML-OVA。對制備的人工完全抗原進行紫外線掃描(UV)、聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定。免疫Balb/c小鼠的結(jié)果表明:2號小鼠的免疫效果最好,其免疫血清...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 食品安全的簡介
    1.2 泰妙菌素的簡介
        1.2.1 泰妙菌素的理化性質(zhì)
        1.2.2 泰妙菌素的化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.2.3 泰妙菌素的抗菌活性及作用機理
        1.2.4 泰妙菌素的用法
        1.2.5 泰妙菌素的毒性和不良癥狀
    1.3 泰妙菌素常用的檢測方法
        1.3.1 氣相色譜法
        1.3.2 高效液相色譜法
        1.3.3 超高效液相色譜串聯(lián)-質(zhì)譜法檢測TML
        1.3.4 免疫學(xué)檢測方法
    1.4 抗體的應(yīng)用
        1.4.1 多克隆抗體技術(shù)
        1.4.2 單克隆抗體技術(shù)
    1.5 獸藥人工完全抗原的制備
        1.5.1 獸藥人工完全抗原制備的原則
        1.5.2 常用的獸藥人工完全抗原的合成方法
    1.6 本研究的目的及主要內(nèi)容
2 TML人工完全抗原的合成及鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 實驗儀器及設(shè)備
        2.1.2 主要耗材及試劑
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 TML人工完全抗原的合成
        2.2.2 TML人工完全抗原濃度的測定
        2.2.3 TML人工完全抗原UV鑒定
        2.2.4 TML人工完全抗原SDS-PAGE鑒定
        2.2.5 TML人工完全抗原免疫學(xué)鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 人工完全抗原蛋白濃度的計算結(jié)果
        2.3.2 紫外線掃描法鑒定結(jié)果
        2.3.3 SDS-PAGE鑒定結(jié)果
        2.3.4 免疫學(xué)鑒定
    2.4 討論
        2.4.1 載體蛋白的選擇
        2.4.2 人工完全抗原的制備
    2.5 小結(jié)
3 TML單克隆抗體的制備及鑒定
    3.1 材料
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 試劑及耗材
        3.1.3 實驗溶液
        3.1.4 實驗動物及細胞
    3.2 實驗方法
        3.2.1 骨髓瘤細胞培養(yǎng)
        3.2.2 融合鼠的選擇及其超免
        3.2.3 飼養(yǎng)細胞的制備
        3.2.4 小鼠脾細胞的制備
        3.2.5 細胞融合
        3.2.6 陽性雜交瘤細胞的篩選
        3.2.7 陽性雜交瘤細胞的亞克隆
        3.2.8 雜交瘤細胞株的擴大培養(yǎng)與及時凍存
        3.2.9 雜交瘤細胞株的復(fù)蘇和其穩(wěn)定性
        3.2.10 單抗腹水的制備及純化
    3.3 單抗的鑒定
        3.3.1 單抗?jié)舛葯z測及純度的測定
        3.3.2 單抗效價及敏感性的測定
        3.3.3 單抗親和力的測定
        3.3.4 單抗交叉反應(yīng)率(CR)的測定
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 雜交瘤細胞株的建立
        3.4.2 雜交瘤細胞株的穩(wěn)定性
        3.4.3 單抗的濃度及純度
        3.4.4 單抗的效價及敏感性
        3.4.5 單抗的親和常數(shù)
        3.4.6 單抗的交叉反應(yīng)率
    3.5 討論
        3.5.1 融合時間的選擇
        3.5.2 關(guān)于融合效率和篩選雜交瘤細胞
        3.5.3 關(guān)于單抗的大量制備及其純化
    3.6 小結(jié)
    3.7 結(jié)論與討論
參考文獻
附錄 英文縮寫詞匯表
致謝
個人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號：3807129