中東呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）是2012年發(fā)現(xiàn)的新型高致病性冠狀病毒,其病死率高達(dá)34.4%。人二肽基肽酶-4（human dipeptidyl peptidase-4,hDPP4）分子是MERS-CoV進(jìn)入宿主細(xì)胞的受體。為了獲得穩(wěn)定的MERS-CoV易感小鼠模型,本文分別利用Tol2轉(zhuǎn)基因技術(shù)和CRISPR/Cas9技術(shù)將hDPP4受體導(dǎo)入C57BL/6小鼠,篩選獲得轉(zhuǎn)基因小鼠hDPP4-Tg、定點(diǎn)敲入小鼠hDPP4-KI;通過Q-PCR、Western Blot及活體成像技術(shù),分析了hDPP4基因的表達(dá)特征。結(jié)果顯示,在hDPP4-Tg小鼠中,其表達(dá)水平較低,在腦中高表達(dá);而在hDPP4-KI中整體表達(dá)水平高,表達(dá)優(yōu)勢臟器為肺。假病毒感染實(shí)驗(yàn)表明,hDPP4-Tg幾乎不易感,而hDPP4-KI小鼠對假病毒高度易感。進(jìn)而,對假病毒感染hDPP4-KI小鼠的感染途徑、感染劑量、是否剃除被毛等條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得了穩(wěn)定易感的MERS-CoV假病毒感染模型,并利用該模型初步評價了單克隆... 

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 倫理與實(shí)驗(yàn)動物
    2 基因修飾動物模型的構(gòu)建
    3 hDPP4表達(dá)量檢測
        3.1 通過定量即時聚合酶鏈鎖反應(yīng)（Quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR）檢測h DPP4基因在體內(nèi)表達(dá)
        3.2 通過Western Blot檢測hDPP4表達(dá)
        3.3 活體成像法檢測hDPP4基因表達(dá)
    4 假病毒構(gòu)建與滴定
    5 小鼠活體成像及感染途徑條件優(yōu)化
    6利用假病毒感染模型評價抗體抑制活性
結(jié)果
    1轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建及建系
    2兩種基因修飾動物模型建系能力比較
    3 hDPP4在hDPP4-Tg、hDPP4-KI小鼠中表達(dá)水平比較
    4 MERS-CoV假病毒感染模型的建立
    5 實(shí)驗(yàn)條件對MERS-CoV感染結(jié)果的影響
    6 利用假病毒模型評價單克隆抗體hMS-1的中和活性
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MERS-CoV動物模型研究進(jìn)展[J]. 藍(lán)佳明,鄧瑤,譚文杰.  病毒學(xué)報. 2016(03)
[2]中東呼吸綜合征冠狀病毒感染的流行病學(xué)進(jìn)展[J]. 王文玲,譚文杰,李德新.  中華疾病控制雜志. 2016(04)



本文編號：3696280