目的獲得穩(wěn)定高表達人GPC3的SK-Hep-1細胞系。方法構建人GPC3真核表達載體pc DNA3. 1-GPC3,通過電穿孔的方法轉染至SK-Hep-1細胞,利用G418進行細胞篩選,獲得穩(wěn)定高表達GPC3的細胞系。再利用Western blot和流式細胞術進行鑒定,分析穩(wěn)定轉染細胞表面GPC3蛋白的表達情況。結果成功構建的真核表達質粒pc DNA3. 1-GPC3,檢測發(fā)現SK-Hep-1細胞G418最佳篩選濃度為700μg/m L,利用該濃度G418篩選轉染SK-Hep-1細胞,獲得了細胞表面能夠穩(wěn)定高表達人GPC3蛋白的SK-Hep-1細胞系。結論建立高表達人GPC3蛋白的SK-Hep-1穩(wěn)定細胞系,為研究靶向GPC3肝癌抗體提供了物質基礎。 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 pcDNA3.1-GPC3質粒構建與鑒定
        1.3.2 SK-Hep-1細胞最佳G418篩選濃度的確定
        1.3.3 SK-Hep-1細胞電轉及篩選
        1.3.4 Western blot檢測GPC3蛋白表達情況
        1.3.5 流式檢測細胞表面GPC3表達情況
2 結果
    2.1 GPC3的合成及表達載體構建
    2.2 重組真核表達質粒鑒定
    2.3 SK-Hep-1細胞最佳G418篩選濃度確定
    2.4 Western blot檢測GPC3的表達
    2.5 流式細胞檢測穩(wěn)定轉染細胞表面GPC3的表達
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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