目的:研究神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子Netrin-1對(duì)煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）感染的真菌性角膜炎發(fā)病機(jī)制的作用及對(duì)角膜上皮細(xì)胞增殖和遷移的影響。方法:1、煙曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎動(dòng)物模型,用PCR法、Western blot法及免疫熒光法檢測(cè)小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1 mRNA和蛋白的表達(dá);用PCR法檢測(cè)小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1受體A2BAR mRNA的表達(dá)。2、重組蛋白Netrin-1預(yù)處理后建立小鼠真菌性角膜炎動(dòng)物模型,觀察小鼠角膜感染后臨床評(píng)分;用PCR法和Western blot法檢測(cè)Netrin-1預(yù)處理前后感染角膜中IL-1β、TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白的表達(dá);采用免疫熒光法及MPO法檢測(cè)Netrin-1預(yù)處理前后感染角膜中中性粒細(xì)胞的數(shù)量變化。3、煙曲霉菌刺激RAW264.7細(xì)胞,PCR法、Western blot法檢測(cè)正常細(xì)胞及煙曲霉菌刺激后4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)細(xì)胞中Netrin-1 mRNA和蛋白的表達(dá);PCR法... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abtract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑和耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 煙曲霉菌培養(yǎng)及菌絲抗原刺激液的制備
        2.2 小鼠真菌性角膜炎模型的建立
        2.3 小鼠角膜預(yù)處理實(shí)驗(yàn)
        2.4 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)和煙曲霉菌菌絲刺激實(shí)驗(yàn)
        2.5 RAW264.7 細(xì)胞預(yù)處理實(shí)驗(yàn)
        2.6 Real-time RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法
        2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)方法
        2.8 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)方法
        2.9 比色法檢測(cè)小鼠角膜中性粒細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶(MPO)
        2.10 CCK-8 細(xì)胞增殖檢測(cè)
        2.11 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 C57BL/6 小鼠真菌性角膜炎中Netrin-1 及其受體A2BAR的表達(dá)
    2 重組Netrin-1 對(duì)感染煙曲霉菌的C57BL/6 小鼠角膜炎癥的影響
    3 Netrin-1 抑制煙曲霉菌刺激的RAW264.7 細(xì)胞的炎癥反應(yīng)
    4 Netrin-1 通過(guò)其受體A2BAR在C57BL/6小鼠和RAW 264.7細(xì)胞中發(fā)揮抑炎作用
    5 Netrin-1 促進(jìn)HCECs增殖和遷移
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
附錄
致謝



本文編號(hào)：3642753