抗生素廣泛用于細菌感染的治療。但是,抗生素的過度使用和濫用加劇了細菌產(chǎn)生耐藥性的速度,從而導(dǎo)致了人類和動物的高發(fā)病率和死亡率。耐藥細菌抵抗幾乎所有的抗生素,包括青霉素類、頭孢類、碳青霉烯類、以及被譽為“最后一道防線”的糖肽類抗生素。尤其是D-D二肽酶VanX及金屬β-內(nèi)酰胺酶（MβLs）介導(dǎo)的超級細菌使得幾乎所有的抗生素失去了效力,導(dǎo)致臨床醫(yī)學(xué)危機。鑒于細菌耐藥研究的重要性,本論文開展了以下工作:1、D-D二肽酶VanX是革蘭氏陽性菌耐萬古霉素的靶酶。由于缺乏發(fā)色底物,對VanX的連續(xù)活性評價成為了一項挑戰(zhàn)性工作。本文建立了一種等溫滴定微量熱（ITC）方法,用于VanX及其耐藥細菌的實時活性評價與抑制,進而測得VanX水解D-Ala-D-Ala的熱動力學(xué)參數(shù)K_m（0.29 mM）和k_cat(37.3 s^-1)及其D-半胱氨酸抑制劑的抑制常數(shù)K_i（20.8μM）。通過ITC測得的這些熱/動力學(xué)參數(shù)與鎘茚三酮法測定及文獻報道的數(shù)據(jù)一致。本文通過ITC表征了耐藥細菌（包括臨床菌）活菌體內(nèi)VanX的活性及其... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

抗生素的發(fā)展歷程

β-Lactams Cell-wall synthesis BacteriocidalPenicillinsCephalosporinsCarbapenemsAminoglycosides Protein synthesis BacteriocidalSpectinomycinKanamycinNeomycinTetracyclines Protein synthesis BacteriostaticTetracyclineDoxycyclineChloramphenicols Protein synthesis BacteriostaticChloramphenicolMacrolides Protein synthesis BacteriostaticErythromycinClarithromycinGlycopeptides Cell-wall synthesis BacteriocidalVancomycinTeicoplaninAnsamycins RNAsynthesis Bacteriocidal RifamycinQuinolones DNAsynthesis Bacteriocidal CiprofloxacinStreptogramins Protein synthesis Bacteriocidal Pristinamycin

7圖 1-5 β-內(nèi)酰胺類抗生素主要耐藥機理對于第一種最常見的耐藥機制，細菌能產(chǎn)生可以水解 β-內(nèi)酰胺類抗生素的酶，使抗生素失活，因此將這種酶稱作 β-內(nèi)酰胺酶[22]。β-內(nèi)酰胺酶通過水解四元 β-內(nèi)酰胺環(huán)的酰胺鍵從而使細菌對抗生素產(chǎn)生顯著的耐藥性。這些酶在革蘭氏陰性菌中尤其重要，因為它們是革蘭氏陰性耐藥菌對 β-內(nèi)酰胺類藥物的主要防御機制。已知大于470種β-內(nèi)酰胺酶基于氨基酸序列相似性被分成四個類(A到D)類[23,24]其中 A，C 和 D 類擁有共同的機制，以絲氨酸殘基作為活性位點親核進攻 β-內(nèi)酰胺環(huán)，使 β-內(nèi)酰胺抗生素開環(huán)失活，所以被統(tǒng)稱為絲氨酸 β-內(nèi)酰胺酶。而 B 類以一個或兩個金屬鋅離子作為活性基團，進攻抗生素內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基，使其開環(huán)失活，被稱為金屬 β-內(nèi)酰胺酶[25]。


本文編號：3624231